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本制品是一款适用于DNA模板的探针法qPCR专用预混液。核心组分HotStart Taq DNA聚合酶是基于抗体法修饰的热启动DNA聚合酶。搭配经过优化的缓冲体系，显著提高了多重靶标的扩增性能、扩增灵敏度和特异性，同时，提高了对模板中可能含有的杂质的耐受性。试剂中引入了dUTP/UDG防污系统，37℃反应2min即可有效去除体系中存在的污染物，同时当反应体系升温至90～95℃时，UDG酶彻底失活。可维持cDNA的完整性，保证结果的准确性。此外，本制品只需额外加入引物、探针、模板即可，使用方便，还可兼容快速程序，缩短检测时间。同时，配有不同浓度ROX校准染料，用于不同仪器校正孔间荧光信号误差。

• 优异的扩增灵敏度：抗体法修饰热启动Taq DNA聚合酶搭配精心优化的缓冲体系，提高了低浓度模板的检测灵敏度；
  
• 高耐受性：精心优化的缓冲体系，提高反应体系对杂质的耐受性；
  
• 支持快速扩增程序：40min完成扩增；
  
• 支持全预混：支持引物探针提前预混，加入模板即可反应；
  
• 使用便捷：PCR反应所必需试剂集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

• 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast/StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：7500/7500 Fast/ViiA7/QuantStudio 3,5,6 Flex,7 Flex,12k Flex；
  Stratagene：MX4000/MX3005P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad：CFX96/CFX384/iCycler iQ/iQ5/MyiQ/MiniOpticon/Opticon/Opticon2/Chromo4；
  Eppendorf：MasterCycler ep realplex/realplex 2s；
  Cepheid：SmartCycler；
  Illumina：Eco qPCR；
  Roche Applied Science：LightCycler480/LightCycler2.0/Lightcycler96；
  Thermo Scientific：PikoReal Cycler；
  Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。

• 请上下颠倒轻轻混合均匀，避免起泡，并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免污染；
  
• 引物设计：一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应，扩增目标序列越短越好，一般为200bp以下。

• 常用反应体系：按下表加入相应成分配制20μL qPCR反应体系。
  

  成分	用量
  2×BalbStart Probe qPCR SuperMix II(UDG)	10μL
  上游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  下游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  探针(10μM)	0.4μL
  模板	1～2μL
  ROX	0.4μL
  RNase-Free Water	至20μL

• PCR反应程序：
  
  • 常规扩增程序：
    

    反应阶段	温度	时间	循环数
    污染消化	37℃	2min	1
    预变性	95℃	1min	1
    变性	95℃	5s	45～50
    退火/延伸	60℃	30s

    
    
  • 快速扩增程序：
    

    反应阶段	温度	时间	循环数
    污染消化	37℃	2min	1
    预变性	95℃	20s	1
    变性	95℃	1s	40～45
    退火/延伸	60℃	15-20s