产品货号:
JN5044
中文名称:
2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)
英文名称:
2×BalbStart SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)
产品规格:
5mL|25mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real time PCR的专用预混试剂,具有方便、快速、灵敏度高、重复性好等诸多特点。预混液中已经将精心优化的反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、dNTPs、SYBR Green I等试剂预混在一起,是一种2×浓度的预混型试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分简单方便。本制品使用新型抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,从而有效抑制低温下的非特异性扩增,提高反应特异性和扩增效率,非常适用于高特异性的qPCR反应,能够在更宽广的范围内进行准确定量。
同时,本制品利用不同染料混合后产生的变色效应可以有效追踪移液过程,有助于减少移液错误,防止漏加模板。此外,本制品已预混低浓度ROX Reference Dye II,可用于仪器校正孔间荧光信号误差。
- 高特异性:采用新型工艺制备抗体修饰的HotStart Taq DNA聚合酶,无需热启动即可进行PCR反应,大大提高PCR扩增的特异性。
- 高效:精心配制的RealTime PCR专用2×SuperMix,具有更高的扩增效率和扩增灵敏度。
- 快捷:PCR反应所必需试剂集于一管之中,数分钟即可完成反应体系配制。
组分 | 5mL | 25mL |
2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX) | 1mL×5 | 1mL×25 |
10×Dilution buffer | 1mL | 1mL×5 |
RNase-Free Water | 1mL×5 | 1mL×23 |
保存:-20℃,避光
纯度检测:所有组分经检测均无核酸内切酶残留、核酸外切酶残留、核酸残留。
本制品中包含用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差的低浓度ROX Reference Dye,适用于以下荧光定量PCR仪:
ABI 7500/7500 Fast;ABI ViiA7;ABI Q5 Q6;
ABI Quant Studio 6/7 Flex;Stratagene
MX4000/MX3500P/MX3000P及其他需要添加低浓度ROX Reference Dye的荧光定量仪器。
- 使用:请上下颠倒轻轻混合均匀,避免起泡,并经轻微离心后使用。反应液的配制、分装请使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,避免污染。建议反应体积为20~50μL。
- 引物设计:一般为了增加灵敏度及扩增效率且抑制非特异性反应,扩增目标序列越短越好。建议设计成200bp以下。
- 常用反应体系
注:本试剂盒可以实现移液追踪:2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)呈现蓝色,而10x Dilution buffer含有黄色染料呈现出红黄色。当2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX)中加入10×Dilution buffer(黄色)后会产生绿色的变色效应,从而可以根据液体颜色变化准确判断出是否加入模板。成分 用量 2×SYBR Color qPCR SuperMix(Low ROX) 10μL 上游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 下游引物 0.2~1.0μM(终浓度) 模板 1~2μL RNase-Free Water 至20μL
具体操作:10×Dilution buffer为专用浓缩模板稀释液,先用水将模板稀释至目标浓度后,每9μL模板中加入1μL的10×Dilution buffer(总的使用原则为最终模板中Dilution buffer浓度为1×)。已含有Dilution buffer的模板使用体积1~5μL/20μL reaction,推荐2μL/20μL reaction。 - 常用PCR循环
两步法可获得高特异性,三步法可获得高扩增率,用户根据需要选择合适的扩增程序。- 两步法扩增程序:
温度 时间 循环数 95℃ 1分钟 1 95℃ 20秒 35~45 60℃ 1分钟 - 三步法PCR扩增程序:
温度 时间 循环数 95℃ 1分钟 1 95℃ 20秒 35~45 50~60℃ 20秒 72℃ 30秒
- 两步法扩增程序:
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