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本制品是一管式探针法qRT-PCR专用预混液，适用于以RNA为模板（如RNA病毒）的一步法多重定量PCR检测。本制品使用特殊工艺处理的DNA聚合酶和热稳定逆转录酶等，并结合精心优化的反应Buffer，是一种5×浓度的高性能试剂，可在低温下长期保存。同时，本制品运用了dUTP-UDG防污染系统，在PCR反应过程中加入dUTP形成含有dU碱基的扩增产物，此产物可在下次PCR反应前被体系内的UDG酶在室温条件下消化，从而有效防止PCR产物污染造成的假阳性，保证结果的准确性。

• 高灵敏度：检测标准品灵敏度可达10copies/test。
  
• 防污染体系：体系中添加dUTP/UDG防污染系统，可有效降解含U的污染物，降低假阳性。
  
• 多重检测：同一反应管中可同时进行4～6个靶标的检测。

• 本制品搭配相关病毒的特异性引物和探针（需自备）即可实现对相关病毒的快速精准检测。
  
• 使用时请上下颠倒轻轻混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。
  
• 反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，避免RNase污染。
  
• 如客户所用检测仪器为ABI系列等需要ROX校正的荧光定量仪，请根据所使用机型对应加入相应的ROX I（25μM）/ROX II（2.5μM），或将仪器的荧光内参设置为“None”，例如：对于ABI系列仪器，将“Passive Reference”设置为“None”即可。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  5×Multiplex Probe qRT-PCR SuperMix(UDG)	4μL
  上游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  下游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  探针(10μM)	0.4μL
  模板	0.001～500ng
  ROX（需根据机器型号选择）	0.4μL
  RNase-Free Water	至20μL

• 推荐qRT-PCR反应程序
  
  • 常规反应程序：
    

    循环数	温度	时间
    1	50℃	10min
    1	95℃	1min
    40～45	95℃	10s
    	60℃	30s

  • 快速反应程序：
    

    循环数	温度	时间
    1	55℃	2min
    1	95℃	20s
    40～45	95℃	2s
    	60℃	15s

• 用ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast/StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• 用ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI：7500/7500 Fast/ViiA7/QuantStudio 3,5,6 Flex,7 Flex,12k Flex；
  Stratagene：MX4000/MX3005P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要用ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad：CFX96/CFX384/iCycler iQ/iQ5/MyiQ/MiniOpticon/Opticon/Opticon2/Chromo4；
  Eppendorf：MasterCycler ep realplex/realplex 2s；
  Cepheid：SmartCycler；
  Illumina：Eco qPCR；
  Roche Applied Science：LightCycler480/LightCycler2.0/Lightcycler96；
  Thermo Scientific：PikoReal Cycler；
  Qiagen：Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。