产品目录

本试剂盒是以RNA为模板的一步法多重定量检测试剂盒。该试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，反转录为cDNA，使用基因特异性引物进行qPCR扩增，检测探针的荧光值进行定量。cDNA合成和qPCR反应在一个管中进行，反转录结束后可直接进行qPCR扩增而不用增加额外的步骤，有助于大量样品的处理并减少污染机会。并且可以加入多对引物，在一个管中针对多个基因进行多重扩增。本试剂盒由经过特殊工艺处理的Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs等，并结合精心优化的反应缓冲液，使反应体系中所有引物都能有效延伸，无需额外优化，能在更广泛的范围内进行准确定量。体系中添加dUTP/UDG防污染系统，可有效降解含U污染物，降低假阳性。

• 高灵敏度：检测标准品灵敏度可达10copies；
  
• 防污染体系：体系中添加dUTP/UDG防污染系统，可有效降解含U污染物，降低假阳性；
  
• 多重检测：同一反应管中可同时进行4～6个靶标的检测。

• 使用时请上下颠倒轻轻混合，避免起泡，并经轻微离心后使用；
  
• 反应液的配制、分装请使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，尽量避免RNase污染；
  
• 为保证反应有效进行，需使用高质量的RNA模板。
  
• 如使用检测仪器为需要ROX校正的荧光定量仪器，请根据所使用机型对应加入相应的ROX，如果不在体系内加入校正剂，请在仪器上将荧光内参设置为“None”，再进行数据分析。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  5×Multiplex qRT-PCR buffer II buffer	5μL
  Multi RT Enzyme Mix II	1.25μL
  上游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  下游引物	0.2～1.0μM(终浓度)
  探针(10μM)	0.5μL
  RNA模板	0.01～1000ng
  ROX（需根据机器型号选择）	0.5μL
  RNase -Free Water	至25μL

• 推荐qPCR反应程序
  

  1	50℃	10min
  1	95℃	1min
  40～45	95℃	10s
  	60℃	20s

• ROX I校准的Real Time PCR仪有：
  ABI5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast;ABI StepOne/StepOnePlus及其他仪器。
  
• ROX II校准的Real Time PCR仪有：
  ABI 7500/7500 Fast；ABI ViiA7;ABI Q6;ABI Quant Studio 6/7 Flex;StratageneMX4000/MX3500P/MX3000P及其他仪器。
  
• 不需要ROX校准的Real Time PCR仪有：
  Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/iQ/My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon/Chromo4；Eppendorf MasterCyclerrealplex/realplex 2s。Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；Roche Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/Rotor-Gene 6000及其他仪器。