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本制品是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，来源于E.coli菌株。利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5'→3'DNA聚合酶活性，但不具有5'→3'外切核酸酶活性。本制品可应用于DNA测序、DNA标记和等温DNA扩增等。

• 富含GC序列的DNA序列测定；
  
• 微量（纳克量）DNA模板的快速测序；
  
• 随机引物DNA标记；
  
• 双链DNA 5'突出端补平法标记；
  
• 可用于等温DNA扩增，如环介导等温扩增（LAMP），全基因组扩增（WGA），解旋酶恒温基因扩增（HDA）等。

• 链置换活性强。
  
• 高灵敏度。
  
• 最佳活性温度为65℃，恒温扩增，无需热循环仪。

65℃条件下，30分钟内使10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。

组分	800U	4000U
Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL)	100μL	100μL×5
10×Bst LF Buffer	1mL×2	1mL×10
dNTPs(10mM each)	200μL	200μL×5

保存：-20℃


50mM KCl，10mM Tris-HCl (pH7.5)，1mM DTT,0.1mM EDTA，0.1% Triton X-100和50% Glycerol。


10×Bst LF Buffer：
200mM Tris-HCl，100mM (NH4)2SO4，500mM KCl，20mM MgSO4，1% Tween 20，pH8.8。


1×Bst LF Buffer，65℃温浴。


80℃加热10分钟。


经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

• Bst DNA聚合酶不具有3'→5'外切酶活性；
  
• 长期贮存需加入100μg/mL BSA或0.1% Triton X-100；
  
• 建议反应温度不要超过70℃；
  
• Bst DNA聚合酶不能用于热循环测序或PCR。

成分	用量
10×Bst LF Buffer	2.5μL
F3/B3	0.2μM（终浓度）
FIP/BIP	0.8μM（终浓度）
甜菜碱	1M（终浓度）
dNTPs	400μM（终浓度）
M13 ssDNA模板	2μL
Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL)	1μL（8U）
ddH2O	至25μL

图1．Bst DNA聚合酶大片段用于LAMP实验，以M13 ssDNA为模板，以F3/B3，FIP/BIP为引物，65℃反应1小时后，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
泳道M：1kb DNA Ladder；
泳道1：LAMP扩增产物。
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