产品货号：
JN0020
中文名称：
Phi29 DNA聚合酶
英文名称：
Phi29 DNA Polymerase
产品规格：
125U|625U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有特殊的链置换活性和高效的连续合成特性，对模板有很强的结合能力，可连续合成多达70kb的DNA片段而不从模板上解离。同时该酶具有很强3'→5'外切酶校正功能，保真性比Taq DNA聚合酶高100倍。
- 恒温protein-primed DNA扩增；
- 利用随机引物扩增DNA；
- 滚环复制；
- 复制extended-region。
- 极高的渗入率；
- 超强的链置换能力；
- 保真性高；
- 中温下反应。
| 组分 | 125U | 625U |
| Phi29 DNA聚合酶(10U/μL) | 12.5μL | 12.5μL×5 |
| 10×Phi29 Buffer | 1mL | 1mL×5 |
| 100×BSA | 200μL | 200μL×5 |
| dNTPs (10mM each) | 200μL | 200μL×5 |
保存：-20℃
10mM Tris-HCl(pH7.5)，100mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5% NP40，0.5% Tween 20，50% Glycerol。
65℃加热10分钟。
30℃条件下，10min内能使0.5pmol的dNTPs掺入酸不溶性物所需要酶量定义为1个活性单位。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
- 该酶缓冲液中含有还原剂DTT以便保证其最大酶活。故如果缓冲液不新鲜或经过反复冻融，使用前应添加4mM的DTT。
- 要求更高扩增效率的反应，请选择bjbalb改造的升级版Super Phi29 DNA聚合酶。
- 本制品灵敏度极高，注意防止模板污染。
- Phi29 DNA聚合酶具有极强的3'→5'外切酶活性，能够降解引物，扩增反应中应使用经过硫代修饰的随机引物。
- 常用反应体系(50μL)：
成分 用量 10×Phi29 Buffer 5μL 随机引物（1mM） 1.25μL 菌液或质粒模板（5～10ng/μL) 1μL 加ddH2O至45μL，95℃预变性5min，立即冰浴5min dNTPs (10mM each) 2.5μL 100×BSA 0.5μL Phi29 DNA聚合酶(10U/μL) 2.5μL 30℃过夜 - 热失活：65℃，10分钟。
测序质粒模板的制备
优点：无需细菌培养、收集、裂解和质粒DNA的分离与纯化，不需要离心机和PCR仪。
- 样品处理：在平板上挑取单克隆到10μL无菌水中，取1μL进行反应。
- 样品预变性与质粒扩增：按照反应体系，先进行预变性，并使引物与质粒进行退火，加入其它成分后30℃扩增过夜。如选用Super Phi29 DNA聚合酶反应时间可缩短至1小时。
- 扩增效果检测（可选）：将扩增产物稀释后进行琼脂糖凝胶电泳，如存在合适的酶切位点，可进行酶切反应检测。
- 热失活：65℃，10分钟。
- 测序反应：取上述反应液2μL加8μL无菌水，即可用于直接测序。
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