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本制品是通过蛋白质工程改造的Phi29 DNA聚合酶在大肠杆菌中进行表达后，经多次纯化分离获得。与野生型Phi29 DNA聚合酶相比，具有更高的扩增效率和灵敏度，能极大缩短反应时间。Super Phi29 DNA聚合酶具有特殊的链置换活性和高效的连续合成特性，对模板有很强的结合能力，可连续合成多达70kb的DNA片段而不从模板上解离。同时该酶具有很强3'→5'外切酶校正功能，保真性比Taq DNA聚合酶高100倍。

• 恒温protein-primed DNA扩增；
  
• 利用随机引物扩增DNA；
  
• 滚环复制；
  
• 复制extended-region。

• 极高的渗入率；
  
• 超强的链置换能力；
  
• 保真性高；
  
• 中温下反应；
  
• 极高的灵敏度和扩增效率。

30℃条件下，10min内能使0.5pmol的dNTPs掺入酸不溶性物所需要酶量定义为1个活性单位。

组分	125U	625U
Super Phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	12.5μL	12.5μL×5
10×Super Phi29 Buffer	1mL	1mL×5
100×BSA	200μL	200μL×5
dNTPs (10mM each)	200μL	200μL×5

保存：-20℃


10mM Tris-HCl(pH7.5)，100mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5% NP40，0.5% Tween 20，50% Glycerol。


65℃加热10分钟；


经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

• 本制品灵敏度极高，注意防止模板污染。
  
• Super Phi29 DNA聚合酶具有极强的3'→5'外切酶活性，能够降解引物，扩增反应中应使用经过硫代修饰的随机引物。

图1．以不同量菌液为模板，过夜扩增PUC19质粒。
泳道1-4：0.5μL，1μL，2μL，3μL。
泳道5-8：EcoR I酶切扩增产物。
泳道M：1kb DNA Ladder I。

图2．以人基因组DNA为模板，Super Phi29 DNA聚合酶与野生型Phi29 DNA聚合酶分别进行1小时，2小时，3小时扩增。
泳道1-3：Super Phi29 DNA聚合酶；
泳道4-6：野生型Phi29 DNA聚合酶；
泳道M：1kb DNA Ladder

• 常用反应体系(50μL)：
  

  成分	用量
  10×Super Phi29 Buffer	5μL
  随机引物(1mM)	1.25μL
  质粒模板(5～10ng/μL)	1μL
  加ddH2O至45μL，95℃预变性5min，立即冰浴5min。
  dNTPs (10mM each)	2.5μL
  100×BSA	0.5μL
  Super Phi29 DNA聚合酶(10U/μL)	2.5μL
  30℃反应3h

  
  
• 热失活：65℃，10分钟。

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