加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

Pfu DNA聚合酶图片
产品货号:
JN0016
中文名称:
Pfu DNA聚合酶
英文名称:
Pfu DNA Polymerase
产品规格:
250U|1250U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA聚合酶基因在大肠杆菌中进行表达后经多步纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3'→5'外切酶(校正)活性,当聚合反应发生碱基错配时,聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶,其错误率仅为1.3×10-6,推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。




用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成,DNA片段的补平等。


在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTPs的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。


组分250U1250U
Pfu DNA聚合酶(5U/μL)50μL50μL×5
10×Pfu Buffer with Mg2+1mL1mL×5
dNTPs (10mM each)200μL200μL×5

保存:-20℃


经多次柱纯化,SDS-PAGE检测纯度大于95%,qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。


  • Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3'端"A"突出,其PCR产物的克隆有几种方案:
    • PCR前引物进行5'端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平末端的载体中;
    • 将产物3'末端加A后再与T载体连接;
    • 引物中引入15bp与载体同源序列,利用一步定向克隆试剂盒直接连接到目的载体。
  • 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3'端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20~30bp。另外为了减少由3'→5'外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并最后加入Pfu DNA聚合酶。




  • 2mM Mg2+可以满足绝大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了保证较好的扩增,可调节为2~4mM。
  • 体系中加入推荐的酶量,可以满足大多数PCR扩增,对于某些PCR,为了得到较好的扩增,可适当增加酶量。



JN0016
图1.50μL扩增体系中,以5ng λDNA为模板,对500bp~6.0kb片段的扩增结果。
泳道1:0.5kb;泳道2:1.0kb;
泳道3:2.0kb;泳道4:3.0kb;
泳道5:4.0kb;泳道6:6.0kb;
泳道M:1kb DNA Ladder。


  • 常用反应体系(50μL):
    成分用量
    10×Pfu Buffer with Mg2+5μL
    上游引物0.2~1.0μM(终浓度)
    下游引物0.2~1.0μM(终浓度)
    dNTPs (10mM each)1μL
    模板1~50ng(质粒)
    10ng~1μg(基因组)
    Pfu DNA聚合酶(5U/μl)0.25μL (1.25U)
    ddH2O至50μL
    注:Mg2+终浓度为1.5mM
  • 常用PCR反应程序:
    • 当扩增片段<3K:
      反应阶段温度时间循环数
      预变性94℃90s1
      变性94℃20s 30
      退火50~60℃20s
      延伸72℃1kb/60s
      终延伸72℃5min1
      保温4℃-1
    • 当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp):
      反应阶段温度时间循环数
      预变性94℃20s1
      变性94℃5s30
      退火/延伸68℃1kb/60s
      终延伸72℃5min1
      保温4℃-1

相关搜索:Pfu DNA聚合酶DNA聚合酶高保真Pfu酶Pfu聚合酶Pfu DNA Polymerase
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3