产品货号：
JN0003
中文名称：
第一链cDNA合成试剂盒(去除gDNA)
英文名称：
BalbScript First Strand cDNA Synthesis Kit(gDNA Removal)
产品规格：
50次|100次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶（货号:JN0011），它的RNase H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42～50℃温度。试剂盒中含有重组RNA酶抑制(货号：JN0013），可耐受55℃高温，有效防止RNA降解。本制品含有去基因组成分gDNA Detergent，以RNA为模板进行cDNA第一链合成时，可以同步去除基因组DNA污染，反应结束后，70℃加热5分钟，就可以失活反转录酶、RNA酶抑制剂、gDNA Detergent。
- BalbScript反转录酶无RNase H活性，可避免第一链cDNA合成过程中，RNA/DNA杂交模板链中RNA降解，保证cDNA合成的质量。
- 试剂盒中含去基因组成分，反转录时可同步去除基因组DNA污染。
| 组分 | 50次 | 100次 |
| BalbScript Reverse Transcriptase(200U/μL) | 50μL | 100μL |
| RNase Inhibitor(40U/μL) | 50μL | 100μL |
| gDNA Detergent | 50μL | 100μL |
| 5×BalbScript RT Buffer | 1mL | 1mL×2 |
| dNTPs (10mM each) | 200μL | 400μL |
| Oligo(dT)18(100μM) | 100μL | 200μL |
| Random N6(100μM) | 100μL | 200μL |
| GAPDH Forward primer (10μM) | 20μL | 40μL |
| GAPDH Reverse primer (10μM) | 20μL | 40μL |
| RNase-Free Water | 1mL | 1mL×2 |
- 用DEPC处理实验用到的所有实验器材，或购买已经证明无核酸酶的实验用具，实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
- 确保所用试剂中无RNA酶污染。
- 试剂盒要严格密封保存。在反转录过程中，所有管子确保扣严。
- 纯化过的RNA必须保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，以上成分会干扰第一链cDNA合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 为保证反转录反应有效进行，需使用高质量的RNA模板。
- 有实验结果提示，本反转录酶可在15分钟内完成1kb反转录反应。
第一链cDNA合成
试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
- 按顺序加入以下反应物：
成分 用量 模板RNA 总RNA 0.1ng～5μg poly(A) mRNA 10pg 特异性RNA 0.01pg 引物 Oligo (dT)18 1μL Random N6 1μL 基因特异性引物 15～20pmol 5×BalbScript RT Buffer 4μL RNase Inhibitor 1μL gDNA Detergent 1μL dNTPs (10mM each) 2μL BalbScript Reverse Transcriptase 1μL RNase-Free Water 至20μL
注：如果RNA浓度低或者为了提高灵敏度，可先将RNA中加入gDNA Detergent。42℃消化5min，70℃加热5min终止反应。再配制逆转录体系（不含gDNA Purge）进行反应。
可选步骤：如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将RNA模板和RNase Free Water混匀后，65℃孵育5分钟，冰上冷却，再加入其它组分。 - 轻轻混匀，离心。
- 42℃孵育15～30分钟（如果RNA模板中不含poly A结构，25℃先孵育5分钟，随后42℃孵育15～30分钟）。
- 产物可直接用于下一步反应。如果不立即使用，可于-20℃保存一周，长时间保存建议-70℃放置。
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