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本制品是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液，核心组分BalbExcel热启动Taq DNA聚合酶是一款抗体修饰的热启动酶，95℃加热5秒即可恢复DNA聚合酶的活性，具有特异性强、检测灵敏度高、可兼容快速扩增程序等诸多优点。另外本制品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye，可以兼容多种qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增，操作简单，便捷。

• 使用前请上下颠倒轻轻混匀，并经短暂离心后使用；
  
• 本品尽量避免反复冻融，不可反复冻融超过10次，以免造成酶活下降；
  
• 由于本品检测灵敏度极高，易被空气中气溶胶污染。因此反应体系配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用灭菌枪头、PCR反应管，条件允许的实验室推荐使用专用的移液枪和带滤芯的枪头；
  
• 由于本品中含有荧光染料SYBR Green l，配制反应体系时应尽量避免强光照射。

• 配制PCR反应体系：
  

  成分	20μL反应体系	终浓度
  BalbExcel通用型染料法qPCR预混液	10μL	1×
  正向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
  反向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
  模板DNA	X μL	*
  RNase-Free ddH2O	至20μL	-

  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
    
  • 通常DNA模板的量以1～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
• PCR反应程序设置：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	5～30s	1
  变性	95℃	5～15s	40～45
  退火/延伸	60℃	10～30s
  熔解曲线分析	根据仪器推荐程序设置

  • 预变性条件适合绝大多数的扩增程序，普通标准程序选择30 s，快速程序最短可以设置成5 s，如模板结构复杂可以适当延长预变性时间至3min以提高预变性效果。
    
  • 建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56～64℃的范围作为设定参考。
    
  • 熔解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。
    
  • 标注处设置信号采集。