产品货号:
GS2305
中文名称:
直接PCR扩增试剂盒
英文名称:
Direct PCR Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒可直接从动物组织、植物组织、血液、细胞、人的头发和口腔拭子扩增DNA,无需纯化过程。适于对大规模样品进行高通量的PCR筛选。同样也可应用于基因分型,转基因检测,基因敲除分析和测序。
本试剂盒含有高灵敏和稳定的DNA聚合酶,能对样品(包括DNA粗提液)进行有效扩增,延伸时间较短,并能提高产量。用户只需要加入2×Direct PCR Mix,热启动DNA聚合酶,一份样品,引物和水,即可启动PCR反应。用无菌ddH2O处理样品,有助于PCR的扩增。2×Direct PCR Mix含有凝胶上样试剂和绿色染料,因此PCR结束后PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳。
- 直接进行PCR,无需纯化步骤。
- 相当短的PCR反应时间,大概是1小时/35循环。
- 只需要微量样品。
- 热启动DNA聚合酶对PCR反应抑制剂具有很高的抗性。
- 适用于多种类型的样品。
- PCR结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳。
- 节省时间和金钱。
基因分型、转基因检测、等位基因特异性检测等。
组分 | 50T | 100T |
2×Direct PCR Mix(含绿色染料) | 0.5mL | 1mL |
热启动DNA聚合酶 | 25μL | 50μL |
Sterilized ddH2O | 1mL | 2mL |
保存:-20℃,避免反复冻融。
- 模板
- 动物或植物组织:
- 直接将0.50mm直径的组织(大概和这个点这么大·)加入到20μL PCR反应体系中。
- 加入大概2mg组织到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
- 直接将0.50mm直径的组织(大概和这个点这么大·)加入到20μL PCR反应体系中。
- 植物种子:
除去种皮并切下一小块种子到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。 - 血液:
直接将含有抗凝剂(肝素,EDTA,ACD)的血液0.5~1μL加入到20μL PCR反应体系中。 - 动物细胞:
直接将102~103个细胞加入到20μL PCR反应体系中。 - 细菌:
- 直接从琼脂培养基中挑取单菌落,加入到20μL PCR体系中。
- 直接从琼脂培养基中挑取单菌落,加入到20μL无菌ddH2O。用100μL枪头贴着试管壁将其打碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
- 直接从琼脂培养基中挑取单菌落,加入到20μL PCR体系中。
- 根毛:
剪2~3根根毛,直接加入到20μL PCR体系中。确保样品被溶液浸没。有些情况下,将反应体系提高到50μL能得到更好的结果。 - 口腔拭子:
收集拭子上的口腔细胞并加入到200μL无菌ddH2O中。振荡后对着试管壁用力压住拭子,确保大部分的液体留在管内。扔掉拭子。短暂涡旋,取0.5~1μL的上清作为20μL PCR体系的模板。 - 石蜡包埋组织样品:
单个10μm的石蜡切片组织用50~200μL的PCR反应缓冲液处理,其中含有0.2mg/mL蛋白酶K。缓冲液体积由组织切片的大小确定。样品在60℃水浴1h,然后98℃水浴10min使蛋白酶K失活。样品冷却后离心(16000×g,2min),上清转移到新管中。取1~2μL的上清作为20μL PCR体系的模板。
- 动物或植物组织:
- 根据下表准备反应体系
成分 用量 2×Direct PCR Mix 10μL Sample Little/0.5~2μL Hot Start DNA Polymerase 0.5μL Primer F (10μM) 1μL Primer R (10μM) 1μL Sterilized ddH2O 至20μL - 大多数PCR反应可使用下列循环程序
过程 温度 事件 循环数 预变性 98℃ 30s 1 变性 98℃ 5s 35 退火 50~68℃ 5s 延伸 72℃ 1kb/20s 终延伸 72℃ 1min 1 保持 4℃ - -
- 如果PCR产物GC含量高,请加入1μL DMSO到20μL得PCR反应体系中;
- 如果PCR产物<1kb,延伸时间是20 s;
- PCR产物为平末端
- PCR产物纯化前,短暂离心并将上清移入新管。
- 产物少或没有。
- PCR抑制成分太多。减少起始材料用量。
- 实验样品DNA损伤或降解。使用新鲜样品。
- 引物设计不完善。重新设计引物。
- 循环程序未优化。调整循环条件到最优。提高循环次数。
- 扩增长片段或是样品较难破碎时,请将样品按照说明书进行简单预处理后再进行扩增。
- 困难模板。如果模板DNA的GC含量高,反应体系中加入5% DMSO有助于扩增。另外,使用高浓度的酶,20μL
PCR反应体系中加入高达1μL的酶。
- PCR抑制成分太多。减少起始材料用量。
- 产物多条带。
- 引物设计不完善。重新设计引物。
- 退火温度过低。以2℃为一个增量,将温度提高到5种不同的温度。
- 减少循环次数。
- 引物设计不完善。重新设计引物。
- 产物被污染。
- 起始模板太多。减少起始样本量。
- 引物设计不完善。重新设计引物。
- Mg2+不合适。优化并调整MgCl2浓度。
- 起始模板太多。减少起始样本量。
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