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直接PCR扩增试剂盒图片
产品货号:
GS2305
中文名称:
直接PCR扩增试剂盒
英文名称:
Direct PCR Kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒可直接从动物组织、植物组织、血液、细胞、人的头发和口腔拭子扩增DNA,无需纯化过程。适于对大规模样品进行高通量的PCR筛选。同样也可应用于基因分型,转基因检测,基因敲除分析和测序。


本试剂盒含有高灵敏和稳定的DNA聚合酶,能对样品(包括DNA粗提液)进行有效扩增,延伸时间较短,并能提高产量。用户只需要加入2×Direct PCR Mix,热启动DNA聚合酶,一份样品,引物和水,即可启动PCR反应。用无菌ddH2O处理样品,有助于PCR的扩增。2×Direct PCR Mix含有凝胶上样试剂和绿色染料,因此PCR结束后PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳。




  • 直接进行PCR,无需纯化步骤。
  • 相当短的PCR反应时间,大概是1小时/35循环。
  • 只需要微量样品。
  • 热启动DNA聚合酶对PCR反应抑制剂具有很高的抗性。
  • 适用于多种类型的样品。
  • PCR结束后直接进行琼脂糖凝胶电泳。
  • 节省时间和金钱。



基因分型、转基因检测、等位基因特异性检测等。


组分50T100T
2×Direct PCR Mix(含绿色染料)0.5mL1mL
热启动DNA聚合酶25μL50μL
Sterilized ddH2O1mL2mL

保存:-20℃,避免反复冻融。


  • 模板
    • 动物或植物组织:
      • 直接将0.50mm直径的组织(大概和这个点这么大·)加入到20μL PCR反应体系中。
      • 加入大概2mg组织到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
    • 植物种子:
      除去种皮并切下一小块种子到20μL无菌ddH2O中。用100μL枪头贴着试管壁将组织压碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
    • 血液:
      直接将含有抗凝剂(肝素,EDTA,ACD)的血液0.5~1μL加入到20μL PCR反应体系中。
    • 动物细胞:
      直接将102~103个细胞加入到20μL PCR反应体系中。
    • 细菌:
      • 直接从琼脂培养基中挑取单菌落,加入到20μL PCR体系中。
      • 直接从琼脂培养基中挑取单菌落,加入到20μL无菌ddH2O。用100μL枪头贴着试管壁将其打碎。短暂离心后取上清液0.5~1μL作为20μL PCR反应体系的模板。
    • 根毛:
      剪2~3根根毛,直接加入到20μL PCR体系中。确保样品被溶液浸没。有些情况下,将反应体系提高到50μL能得到更好的结果。
    • 口腔拭子:
      收集拭子上的口腔细胞并加入到200μL无菌ddH2O中。振荡后对着试管壁用力压住拭子,确保大部分的液体留在管内。扔掉拭子。短暂涡旋,取0.5~1μL的上清作为20μL PCR体系的模板。
    • 石蜡包埋组织样品:
      单个10μm的石蜡切片组织用50~200μL的PCR反应缓冲液处理,其中含有0.2mg/mL蛋白酶K。缓冲液体积由组织切片的大小确定。样品在60℃水浴1h,然后98℃水浴10min使蛋白酶K失活。样品冷却后离心(16000×g,2min),上清转移到新管中。取1~2μL的上清作为20μL PCR体系的模板。
  • 根据下表准备反应体系
    成分用量
    2×Direct PCR Mix10μL
    SampleLittle/0.5~2μL
    Hot Start DNA Polymerase0.5μL
    Primer F (10μM)1μL
    Primer R (10μM)1μL
    Sterilized ddH2O至20μL
  • 大多数PCR反应可使用下列循环程序
    过程温度事件循环数
    预变性98℃30s1
    变性98℃5s35
    退火50~68℃5s
    延伸72℃1kb/20s
    终延伸72℃1min1
    保持4℃--



  • 如果PCR产物GC含量高,请加入1μL DMSO到20μL得PCR反应体系中;
  • 如果PCR产物<1kb,延伸时间是20 s;
  • PCR产物为平末端
  • PCR产物纯化前,短暂离心并将上清移入新管。



  • 产物少或没有。
    • PCR抑制成分太多。减少起始材料用量。
    • 实验样品DNA损伤或降解。使用新鲜样品。
    • 引物设计不完善。重新设计引物。
    • 循环程序未优化。调整循环条件到最优。提高循环次数。
    • 扩增长片段或是样品较难破碎时,请将样品按照说明书进行简单预处理后再进行扩增。
    • 困难模板。如果模板DNA的GC含量高,反应体系中加入5% DMSO有助于扩增。另外,使用高浓度的酶,20μL
      PCR反应体系中加入高达1μL的酶。
  • 产物多条带。
    • 引物设计不完善。重新设计引物。
    • 退火温度过低。以2℃为一个增量,将温度提高到5种不同的温度。
    • 减少循环次数。
  • 产物被污染。
    • 起始模板太多。减少起始样本量。
    • 引物设计不完善。重新设计引物。
    • Mg2+不合适。优化并调整MgCl2浓度。

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