产品货号：
GS2304
中文名称：
2×热启动PCR Mix(不含染料)
英文名称：
2×Hotstart PCR Master Mix(without Dye)
产品规格：
1mL|5mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种即用型的PCR混合试剂，含有热启动Taq DNA聚合酶、MgCl2、dNTP Mix和一些PCR添加剂。它是一种2X的混合试剂，含有除引物和模板以外的所有组分，用于PCR中DNA的扩增和检测。含有PCR添加剂的缓冲系统减少了引物二聚体的形成，提高了扩增特异性和效率。简而言之，单一目的条带可以通过2×热启动PCR Mix(不含染料)获得。
2×热启动PCR Mix(不含染料)不含有DNA上样缓冲液，进行琼脂糖凝胶电泳时应向PCR产物中加入DNA上样缓冲液。
| 组分 | 1mL | 5mL |
| 2×热启动PCR Mix(不含染料) | 1mL | 5×1mL |
| Sterilized ddH2O | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃，避免反复冻融。
- 配制反应体系
- 将各成分分别溶解并混匀后短暂离心；
- 根据下表准备反应体系：
注：每50μL反应体系最多使用30～100ng的基因组DNA或5～10ng的质粒。成分 用量 终浓度 2×热启动PCR Mix(不含染料) 25μL 1× 10μM Forward Primer 1.0μL 200 nM 10μM Reverse Primer 1.0μL 200 nM Template DNA 1～2μL - PCR-grade water 至50μL -
- 将各成分分别溶解并混匀后短暂离心；
- 运行PCR
根据以下程序运行PCR：步骤 温度 持续时间 循环数 预变性 95℃ 3min 1 变性 95℃ 15s 30 退火 最佳退火温度 15s 延伸 72℃ 10s 终延伸 72℃ 5min 1
| 问题 | 可能的原因 | 解决方法 |
| 目的条带没有或者很少 | 不正确操作 | 2×热启动PCR Mix中含有热启动DNA聚合酶，因此避免反复冻融。 |
| 无目的扩增产物 | 始终使用纯化、完整的高质量DNA作为模板。用琼脂糖凝胶电泳分析模板的完整性。 确保引物可用。 循环程序中缺少必要步骤，请检查循环程序。 | |
| 引物浓度过低 | 使用引物终浓度为0.1～0.2μM。 | |
| 目的条带以外出现非特异性条带 | 引物很差 | 重新设计引物，再检查一遍。 |
| 引物二聚体的形成 | 引物退火温度不是最优。 重新查看引物并检查其特异性。 |
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