产品货号：
GS2283
中文名称：
2×Taqman qPCR Mix(Low ROX)
英文名称：
2×Taqman qPCR Mastermix(Low ROX)
产品规格：
4×1.25mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种2×浓度的荧光探针定量PCR预混反应液，包含dNTPs、Hotstart Taq polymerase、MgCl2、参考染料和独特的缓冲组分。本制品适用于以TaqMan探针为基础的DNA样品实时PCR分析。本制品具有灵敏度高、信噪比高和特异性强等特点。
ABI7500；StratageneMx3000,Mx3005,Mx4000
| 组分 | 规格 |
| 2×Taqman qPCR Mix(Low ROX) | 4×1.25mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃，避光，有效期2年。
- 每次实验后，已溶解的剩余混合液如果三个月内再次使用，可保存于4℃。2×Taqman qPCR Mix(Low ROX)在储存条件合理，操作得当的条件下可稳定保存2年。
- 反应混合液准备好后即开始PCR，PCR反应开始前始终将反应混合液放在冰盒中冷却。
- SNP基因型检测。
- 基因表达分析。
- 芯片验证。
- 高通量筛选。
- 冰上溶解2×Taqman qPCR Mix(Low ROX)，模板DNA，引物和RNase-free水。彻底混匀各溶液。
- 根据下表准备反应体系：
成分 用量 浓度 2×Taqman qPCR Mix(Low ROX) 10μL 1× TaqMan Probe Variable 100～300 nM Forward Primer Variable 100～500 nM Reverse Primer Variable 100～500 nM RNase-Free ddH2O Variable Template DNA Variable ≤ 500ng/reaction Total Volume 20μL - 根据下列循环程序运行qPCR：
步骤 温度 时间(标准) 时间(快速) 循环数 预变性 95℃ 10min 10min 1 变性 95℃ 15sec 3sec 40 退火/延伸 60℃ 60sec 30sec
| 可能原因 | 意见和建议 |
| 无任何荧光信号 | |
| 循环程序设置错误。 | 检查仪器设置是否与实验相符。 |
| 缺少组分(比如引物、探针或模板)。 | 检查反应混合液的组分。 |
| 探针标记的不够好。 | 重新标记探针。 |
| 循环程序缺少必要步骤 | 检查循环程序。 |
| 反应管是空的，未加入相应试剂 | 离心后检测PCR板中的每一个孔 |
| 荧光信号增加较迟 | |
| 循环程序设置错误。 | 检查仪器设置是否与实验相符。 |
| 起始模板不足。 | 检查模板浓度的计算；如果有可能则提高模板浓度。 |
| 退火温度过高。 | 利用梯度优化退火温度；如果梯度特征不明显，则退火温度按每2℃为一个梯度进行递减。 |
| 探针标记的不够好。 | 重新标记探针。 |
| 扩增片段长导致延伸时间不足。 | 增加延伸时间。 |
| 引物或探针浓度过低。 | 提高引物浓度(每个引物最高为900 nM)。250 nM探针浓度通常足够。 |
| PCR程序不合适。 | 确保使用的是推荐的PCR程序。如有需要，以推荐的程序未出发点进行优化。 |
| 荧光信号正常但效率低 | |
| 吸量误差。 | 检查反应混合液的组成。 |
| 前面反应形成的引物二聚体污染了体系。 | PCR循环开始前用UNG处理。 |
| 引物或探针设计不完善或模板浓度非常低。 | 重新检查引物和探针设计及模板浓度。 |
| 探针标记的不够好。 | 重新标记探针。 |
| 样品中的抑制成分影响反应。 | 重新纯化DNA。 |
| 初始模板浓度低。 | 提高模板量。 |
| 标准曲线的C(t)和模板含量的对数值非线性相关。 | |
| 模板稀释不准确。 | 重新进行系列稀释并保证样品混合均匀。 |
| 模板含量太高。 | 减少模板含量；提高反应液体积。 |
| 模板含量太低。 | 提高模板含量。 |
| 引物二聚体被共同扩增。 | 重新设计引物。 |
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