产品货号:
GS2277
中文名称:
2×qPCR mix(ROX)
英文名称:
2×Green-Go qPCR Mastermix(ROX)
产品规格:
4×1.25mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是一种非常方便的qPCR预混液,包括dNTPs、Hotstart Fast Taq polymerase、MgCl2、荧光染料、参考染料和独特的的缓冲组分。本制品具有灵敏度高、信噪比高和特异性强等特点。
货号 | 名称 | 适用仪器 | 规格 |
GS2277 | 2×Green-Go qPCR Mix(ROX) | ABI 7000,7300,7700,7900; StepOnePlus StepOne; Eppendorf Realplex 4 | 4×1.25mL |
GS2278 | 2×Green-Go qPCR Mix(Low ROX) | ABI7500; StratageneMx3000,Mx3005,Mx4000 | 4×1.25mL |
GS2279 | 2×Green-Go qPCR Mix(iCycler) | BioRad iCycler,iQ5,MyiQ | 4×1.25mL |
GS2280 | 2×Green-Go qPCR Mix | BioRad CFX96; Roche LightCycler480; MJResearch Opticon and Opticon 2; MJ research Chromo4; Corbett Rotor-grene600,3000; EppendorfRealplex 2 | 4×1.25mL |
保存:-20℃,避光,避免反复冻融,有效期2年。
反应混合液准备好后即开始PCR,PCR反应开始前始终将反应混合液放在冰盒中冷却。
- 冰上溶解Green-Go qPCR Mix,模板DNA,引物和RNase-free水。彻底混匀各溶液组分。按下表配制反应体系:
成分 用量 终浓度 2×Green-Go Mastermix 10μL 1× Forward Primer(10μM) 0.2~0.4μL 100~200 nM Reverse Primer(10μM) 0.2~0.4μL 100~200 nM Template DNA Variable ≤ 500ng/reaction RNase-Free ddH2O 至20μL - - 根据下列循环程序运行qPCR:
步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 3min 1 变性 95℃ 3sec 40 退火/延伸/数据采集 60℃ 20sec 溶解曲线分析 按照仪器要求进行设置
- 无任何荧光信号
可能原因 意见和建议 循环程序设置错误。 检查仪器设置是否与实验相符。 缺少组分(比如引物或模板)。 检查反应混合液的组成。 循环程序缺少必要步骤 检查循环程序。 反应管是空的,未加入相应试剂 离心后检测PCR板中的每一个孔 - 荧光信号增加较迟
可能原因 意见和建议 循环程序设置错误。 检查仪器设置是否与实验相符。 起始模板不足。 检查模板浓度的计算;如果有可能则提高模板浓度。 退火温度过高。 利用梯度优化退火温度;如果梯度特征不明显,则退火温度按每2℃为一个梯度进行递减。 扩增片段长导致延伸时间不足。 增加延伸时间。 引物浓度过低。 提高引物浓度(每个引物最高为900 nM)。 PCR程序不合适。 确保使用的是推荐的PCR程序。如有需要,以推荐的程序为出发点进行优化。 - 荧光信号正常但效率低
可能原因 意见和建议 吸量误差 检查反应混合液的组成。 前面反应形成的引物二聚体污染了体系。 PCR循环开始前用UNG处理。 引物设计不完善或模板浓度非常低。 重新检查引物设计及模板浓度。 样品中的抑制成分影响反应。 重新纯化DNA。 初始模板浓度低。 提高模板量。 - 标准曲线的C(t)和模板含量的对数值非线性相关。
可能原因 意见和建议 模板稀释不准确。 重新进行系列稀释并保证样品混合均匀。 模板含量太高。 减少模板含量;提高反应液体积。 模板含量太低。 提高模板含量。 引物二聚体被共同扩增。 重新设计引物。
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