产品货号：
GS2039
中文名称：
M-MuLV逆转录酶
英文名称：
M-MuLV Reverse Transcriptase
产品规格：
2kU|10kU|50kU
发货周期：
1～3天
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M-MuLV逆转录酶具有RNA和DNA依赖的聚合酶活性和RNase H活性。该酶的RNase H活性比禽类成髓细胞瘤逆转录酶(AMV)低很多。高效制备全长的第一链cDNA，最长可达13kb。最佳活性温度为42℃。温度高达50℃时仍有活性。合成掺入修饰核苷酸。
高效合成全长第一链cDNA至13kb，在42℃时的活性高达50℃的活性加入修饰的核苷酸。
◆ 第一链cDNA合成，用于RT-PCR和实时RT-PCR。
◆ 合成cDNA，用于克隆和表达研究。
◆ 制备芯片研究用标记的cDNA探针。
◆ DNA标记。
◆ 引物延伸法分析RNA。
含有克隆基因pol的大肠杆菌，该基因编码小鼠白血病病毒逆转录酶。
在37℃，10分钟内将1nmol dTMP合成掺入多聚的核苷酸片段所需要的酶量定义为1U。
| 组分 | 2kU | 10kU | 50kU |
| M-MuLV逆转录酶(200U/μL) | 10μL | 50μL | 5×50μL |
| 5×RT Buffer | 1mL | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃
50mM Tris-HCl (pH7.5)，0.1M NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，0.1% (v/v) Triton X-100，50% (v/v)甘油。
5×Reaction Buffer：
250mM Tris-HCl (pH8.3@25℃)，250mM KCl，20mM MgCl2，50mM DTT。
金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸和多胺。
70℃加热10分钟
一、cDNA第一链合成
- 溶液融化后轻轻混匀，短暂离心后冰浴放置。按以下顺序在灭菌、无核酸酶的试管(冰浴放置)中加入以下成分。
成分 用量 模板RNA 总RNA 10ng～5μg 或poly(A)RNA 1～500ng 或特异性RNA 0.01pg～0.5μg 引物 Oligo(dT)18 0.5μg (100pmol) 或随机六聚体引物 0.2μg(100pmol) 或基因特异性引物 15~20pmol DEPC水 至12.5μL - 可选：如果RNA模板的GC含量较高或含有二级结构，轻轻混匀后短暂离心，65℃孵育5分钟后冰浴冷却，短暂离心后冰浴放置。
- 按下表指定顺序加入各成分。
成分 用量 5×RT Buffer 4μL RNase inhibitor 0.5μL(20U) dNTP Mix,10mM each 2μL M-MuLV逆转录酶(200U/μL) 1μL - 轻轻混匀后短暂离心。
- 如果使用oligo(dT)18引物或基因特异性引物，42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，25℃孵育10分钟后再用42孵育60分钟。如果需逆转录富含GC的RNA，可将反应温度增加到45℃。
- 70℃加热10分钟终止反应。
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