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本试剂盒包含建立LAMP反应体系（除引物和模板之外）的所有组分。LAMP是一种新型的核酸等温扩增方法，其广泛应用于细菌，病原微生物，寄生虫以及病毒等的快速检测。与目前广泛应用的real time qPCR技术相比，其需要四到六条模板特异性的引物以及具有链置换活性的DNAPolymerase，在等温条件下1h内完成扩增；扩增产物肉眼可见，或者加入相应的检测染料即可判断是否有扩增产物存在，无需昂贵的荧光定量PCR仪或者电泳设备等；LAMP检测方法具有特异性好，灵敏度高及检测范围广泛等优势，可与real timeqPCR检测技术相媲美。总之，LAMP检测方法由于其特异性好，灵敏度高，反应设备及检测设备价格低廉等广受科研工作者的亲睐，是未来检测技术发展的趋势。

• 冰上溶解2×LAMP MasterMix和引物，并充分混匀，然后按照下表建立反应体系：
  

  成分	用量	终浓度
  2×Lamp Master Mix	12.5μL	1×
  FIP (10μM)	2μL	0.8μM
  BIP (10μM)	2μL	0.8μM
  Loop F (10μM)（可选）	1μL	0.4μM
  Loop B (10μM)（可选）	1μL	0.4μM
  F3 (10μM)	0.5μL	0.2μM
  B3 (10μM)	0.5μL	0.2μM
  Template DNA	25～100ng	1～4ng/μL
  DNA Polymerase	0.5μL	0.16U/μL
  Sterilized ddH2O	至25μL	-

  
  
  • 如果反应产物检测采用钙黄绿素法，需要在反应体系中加入1μL钙黄绿素-Mn2+混合物，并充分混匀；反应体系的建立需要无气溶胶污染的环境进行，否则会造成阴性污染。
• 将上述反应管充分混匀，然后置于65℃水浴锅中保温30～60min。
  
• 80℃ 10min灭活DNA Polymerase。
  
• 反应产物可采用下述几种方法进行检测：
  
  • 钙黄绿素检测法：若反应体系中加入钙黄绿素-Mn2+混合物，反应完成之后可以将反应管置于紫外灯下观察，若为亮绿色，说明扩增产物存在；否则表明无扩增。
    
  • 琼脂糖电泳法：取3～5μL扩增产物，1%琼脂糖电泳检测，可见不同大小条带组成的lamp特征图谱；
    
  • 荧光定量实时检测。