产品货号：
BY0001
中文名称：
一步法RT-qPCR试剂盒(SYBR Green)
英文名称：
One-Step RT-qPCR kit(SYBR Green)
产品规格：
100T|500T|1000T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行一步法实时荧光定量检测的专用试剂盒，非常适合于RNA病毒等微量目标基因的检测。
本试剂盒以总RNA为模版，反转录和qPCR检测在同一反应管内进行，可最大限度地减少人为操作误差、节约PCR实验操作时间、并能有效防止污染。除此之外，本产品的每个批次均进行严格校准，保证了批次间一致性。
本产品含有高效的反转录酶、抗体型热启动Taq DNA聚合酶、RNase抑制剂、SYBR Green I、dNTPs、dUTP、不耐高温的UNG、Mg2+、反应缓冲液、稳定剂和ROX等成分。高效的反转录酶是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，可在55℃条件下10min精准合成长达12kb cDNA。抗体型热启动Taq DNA聚合酶是一种与抗体结合的高品质热启动酶，高温加热前，抗Taq单克隆抗体与热启动Taq DNA聚合酶结合，抑制其活性，从而有效避免低温条件下由引物和模板非特异性杂交或引物二聚体引起的扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应的预变性过程中完全失活，不会阻碍之后Taq酶聚合反应，从而大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。
此外，所有通过Taq酶扩增反应合成的“DNA链”中都会掺入dUTP。在预变性开始前，预混液中的UNG会将这些掺入了dUTP的“DNA链”降解，以防止他们影响基础荧光信号的准确性。预变性程序开始后，UNG将会彻底失活，因此不影响后续扩增程序。
保存：-20℃避光，有效期1年。
注：
相关搜索：一步法RT-qPCR试剂盒(SYBR Green)，一步法qRT-PCR试剂盒，一步法RT-qPCR试剂盒，一管式RT-qPCR试剂盒，一管式qRT-PCR试剂盒，一管式荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)，One-Step RT-qPCR kit(SYBR Green)
本试剂盒以总RNA为模版，反转录和qPCR检测在同一反应管内进行，可最大限度地减少人为操作误差、节约PCR实验操作时间、并能有效防止污染。除此之外，本产品的每个批次均进行严格校准，保证了批次间一致性。
本产品含有高效的反转录酶、抗体型热启动Taq DNA聚合酶、RNase抑制剂、SYBR Green I、dNTPs、dUTP、不耐高温的UNG、Mg2+、反应缓冲液、稳定剂和ROX等成分。高效的反转录酶是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，可在55℃条件下10min精准合成长达12kb cDNA。抗体型热启动Taq DNA聚合酶是一种与抗体结合的高品质热启动酶，高温加热前，抗Taq单克隆抗体与热启动Taq DNA聚合酶结合，抑制其活性，从而有效避免低温条件下由引物和模板非特异性杂交或引物二聚体引起的扩增。抗Taq单克隆抗体在PCR反应的预变性过程中完全失活，不会阻碍之后Taq酶聚合反应，从而大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。
此外，所有通过Taq酶扩增反应合成的“DNA链”中都会掺入dUTP。在预变性开始前，预混液中的UNG会将这些掺入了dUTP的“DNA链”降解，以防止他们影响基础荧光信号的准确性。预变性程序开始后，UNG将会彻底失活，因此不影响后续扩增程序。
| 组分 | 100T | 500T | 1000T |
| One-Step Enzyme Mix | 200μL | 1mL | 2×1mL |
| 2×One-Step qRT-PCR Buffer | 1mL | 5mL | 2×5mL |
| 25×ROX I | 80μL | 400μL | 800μL |
| 25×ROX II | 80μL | 400μL | 800μL |
| DEPC水 | 1mL | 5mL | 2×5mL |
保存：-20℃避光，有效期1年。
注：
- 需加入25×ROX I的机型:ABI Prism7000/7300/7700/7900HT和ABI Step One/ABI Step One Plus。
- 需加入25×ROX II的机型:ABI Prism7500/7500 Fast,MJ Research Chromo4,Opticon (II),Corbett Rotor Gene 3000。
- 无需加入ROX的机型:Thermal Cycler Dice Real Time System,LightCycler,Smart Cycler System，Corbett Rotor-gene 6000,Agilent Technologies Mx3000P等荧光定量PCR仪。
- 本品不能用于杂交探针法（Taqman Probe qPCR）。
- 注意减少qRT-PCR Buffer在光下的曝露时间，长时间的曝光可导致荧光信号减弱。
- 反应液的配制、分装使用无菌无酶的枪头和移液管，避免污染。
- 需要同时进行多个反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失。同时，可避免重复分取同一试剂，减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
- 使用One-Step Enzyme Mix时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。-20℃保存，使用后应立即放回冰箱。
- 一步法qRT-PCR反应体系配制
- 融解qRT-PCR反应所需的各种溶液，上下颠倒轻轻混匀（避免起泡），短暂离心后置于冰盒内，所有操作过程应在冰上进行。
- qRT-PCR反应体系：（以20μL反应体系为例）
成分 用量 终浓度 RNA模板 1～2μL 10pg～100ng 上游引物(10μM) 0.4μL 0.2μM 下游引物(10μM) 0.4μL 0.2μM 2×One-Step qRT-PCR Buffer 10μL 1× One-Step Enzyme Mix 2.0μL - 25×ROX 0.8μL 1× DEPC水 至20μL
注：
① 推荐20μL反应体系中加入Total RNA的量为10pg～100ng。
② 引物的终浓度可在0.1μM～1μM之间调整。
③ 请根据real time PCR仪的型号，选择对应的ROX，或者不加ROX。
- 融解qRT-PCR反应所需的各种溶液，上下颠倒轻轻混匀（避免起泡），短暂离心后置于冰盒内，所有操作过程应在冰上进行。
- qRT-PCR反应条件的设置
- 两步法qRT-PCR扩增标准程序：
过程 温度 时间 循环数 反转录 50℃ 5～15min 1 预变性 94℃ 2min 1 变性 94℃ 15s 35～45 退火/延伸 60℃ 15～30s 熔解曲线 仪器自动设置 - 三步法qRT-PCR扩增标准程序
过程 温度 时间 循环数 反转录 50℃ 5～15min 1 预变性 94℃ 2min 1 变性 94℃ 15s 35-45 退火 60℃ 15-30s 延伸 72℃ 30s 熔解曲线 仪器自动设置
注：
① 通常qPCR产物长度在80～200bp，此时采用5min的反转录时间即可。
② 对于超过350bp或者高GC含量的扩增片段，建议增加延伸时间至60s或者采用三步法以提高扩增效率。
- 两步法qRT-PCR扩增标准程序：
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