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唾液直接PCR预混液(探针法)图片
产品货号:
BTN231118
中文名称:
唾液直接PCR预混液(探针法)
英文名称:
2X Saliva DNA Direct Probe qPCR Mix
产品规格:
1mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是在探针法qPCR Mix基础上改进的产品,可以直接用唾液为模板进行PCR扩增,不需要任何DNA纯化过程。




  • 以2×预混液形式提供,用户只需准备模板、引物和探针即可以进行探针法实时定量PCR。
  • 直接以唾液为模板,不需要任何DNA纯化和释放过程。
  • 唾液用量可高达到总反应体积的35%,20μL体系可以用7μL唾液,避免了漏检。
  • 灵敏度高,可以检测10拷贝的DNA/反应。
  • 提供足够8次的阳性对照引物、探针和模板。
  • 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
  • 本制品反复冻融20次对扩增效果没有任何影响。



组分规格
2×唾液直接PCR预混液(探针法)1mL
人基因组DNA溶液(104拷贝/μL)50μL

保存:-20℃,有效期1年。


唾液、自备引物、超纯水。


以下操作以定性实验为例
  • 如果有N个样品,则设置N+2个反应,多出的一个是扩增阴性对照(NC),一个是扩增阳性对照(PC)。可以使用确认能被所用引物和探针扩增并检测的DNA作为阳性对照。本试剂盒提供少量人基因组DNA溶液为阳性对照。在N+2个PCR管中按下表设置PCR反应:
    成分N个样品管NC管PC管
    2×唾液直接PCR预混液(探针法)各10μL10μL10μL
    自备引物对(10μM each)各2μL2μL2μL
    自备探针(5μM)各1μL1μL1μL
    N个唾液样本各1~7μL--
    人基因组DNA溶液--7μL
    超纯水至20μL至20μL至20μL
  • 放入荧光PCR仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考。具体需要以使用的引物探针Tm和靶分子长度进行调节。
    • 一般选择三步法PCR:
      步骤温度时间备注
      预变性95℃5分钟
      PCR反应
      (35-45循环)
      95℃15秒靶分子长度最好在80~200bp
      55~65℃15~30秒在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
      72℃ 30秒
    • 如果引物Tm值接近60℃,也可以选择两步法PCR:
      步骤温度时间备注
      预变性95℃5分钟
      PCR反应
      (35-45循环)
      95℃15秒靶分子长度最好在80~200bp
      60℃60秒在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
  • 数据处理:一般情况下,阴性对照Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35~40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。本试剂盒提供的阳性对照。

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