产品货号:
BTN231118
中文名称:
唾液直接PCR预混液(探针法)
英文名称:
2X Saliva DNA Direct Probe qPCR Mix
产品规格:
1mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是在探针法qPCR Mix基础上改进的产品,可以直接用唾液为模板进行PCR扩增,不需要任何DNA纯化过程。
- 以2×预混液形式提供,用户只需准备模板、引物和探针即可以进行探针法实时定量PCR。
- 直接以唾液为模板,不需要任何DNA纯化和释放过程。
- 唾液用量可高达到总反应体积的35%,20μL体系可以用7μL唾液,避免了漏检。
- 灵敏度高,可以检测10拷贝的DNA/反应。
- 提供足够8次的阳性对照引物、探针和模板。
- 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
- 本制品反复冻融20次对扩增效果没有任何影响。
组分 | 规格 |
2×唾液直接PCR预混液(探针法) | 1mL |
人基因组DNA溶液(104拷贝/μL) | 50μL |
保存:-20℃,有效期1年。
唾液、自备引物、超纯水。
以下操作以定性实验为例
- 如果有N个样品,则设置N+2个反应,多出的一个是扩增阴性对照(NC),一个是扩增阳性对照(PC)。可以使用确认能被所用引物和探针扩增并检测的DNA作为阳性对照。本试剂盒提供少量人基因组DNA溶液为阳性对照。在N+2个PCR管中按下表设置PCR反应:
成分 N个样品管 NC管 PC管 2×唾液直接PCR预混液(探针法) 各10μL 10μL 10μL 自备引物对(10μM each) 各2μL 2μL 2μL 自备探针(5μM) 各1μL 1μL 1μL N个唾液样本 各1~7μL - - 人基因组DNA溶液 - - 7μL 超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 放入荧光PCR仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考。具体需要以使用的引物探针Tm和靶分子长度进行调节。
- 一般选择三步法PCR:
步骤 温度 时间 备注 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(35-45循环)95℃ 15秒 靶分子长度最好在80~200bp 55~65℃ 15~30秒 在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。 72℃ 30秒 - 如果引物Tm值接近60℃,也可以选择两步法PCR:
步骤 温度 时间 备注 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(35-45循环)95℃ 15秒 靶分子长度最好在80~200bp 60℃ 60秒 在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定。本试剂盒提供的阳性对照探针采用的FAM标记。
- 一般选择三步法PCR:
- 数据处理:一般情况下,阴性对照Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35~40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。本试剂盒提供的阳性对照。
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