产品货号：
BTN131176
中文名称：
FFPE直接RT-PCR试剂盒
英文名称：
FFPE direct RT-PCR Kit
产品规格：
30T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是百奥莱博公司开发的专门用于福尔马林固定和石蜡包埋组织样(FFPE)本的反转录扩增(RT-PCR)。
福尔马林固定和石蜡包埋（FFPE）组织是疾病机制的回顾性临床研究中使用最为广泛的标本。但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。
- 免核酸提取，可以直接作为核酸扩增的模板。
- cDNA第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或专一引物，适合各种情况。
- PCR mix含有上样染料，所以PCR产物可直接上样电泳。
- 两管式操作，RT和PCR分步进行，便于单独优化RT反应和PCR反应的条件。
- 扩增效率高，最高可扩增1kb以上的RNA。
- 本试剂盒足够对50张石蜡切片进行免提取RT-PCR扩增。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| FFPE RNA释放剂 | 30mL |
| 2×SYBR qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| SYBR qRT-PCR酶混合液v2 | 50μL |
| RNase-free水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
阳性对照和阴性对照，RNase-free的1.5mL离心管（耗材）
一、释放样品RNA
- 如果有N个样品，可设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用水作为制备的阴性对照。
- 将1～5片厚度为6～8μm的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管中，并加入1mL FFPE RNA释放剂溶，振荡器上以最大速度振荡10秒。
- 室温放置10分钟。
- 室温14000×g离心1分钟。
- 将上清（含RNA）转移到一个新的RNase-free离心管中。此上清液可以直接用做PCR、RT-PCR、LAMP和RT-LAMP扩增的模板，未用完的可以放-80℃长期保存。
二、设置RT-PCR反应（20μL体系）
- 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个
样品管RT-PCR
阴性对照RT-PCR
阳性对照2×SYBR qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 10μL SYBR qRT-PCR酶混合液v2 各1μL 1μL 1μL 自备RT-PCR引物(10pmol/μL) 各2μL 2μL 2μL 制备的N+2个RNA模板 各7μL 不加 不加 超纯水 不加 7μL 不加 自备RT-PCR阳性对照（如果有）不加 不加 7μL - 上机进行RT-PCR。下面的RT-PCR反应参数仅供参考:
过程 温度 时间 逆转录 42℃ 55分钟 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
（30个循环）95℃ 15秒 55℃ 60秒 65℃ 60秒 延伸 72℃ 10分钟
三、电泳分析
- 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果。
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