产品货号：
BM0353
中文名称：
热启动Taq DNA聚合酶
英文名称：
HotStart Taq DNA Polymerase
产品规格：
1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是使用小分子化合物修饰的热启动Taq DNA Polymerase。在60℃以下化合物可以有效封闭DNA聚合酶活性，高温下发生不可逆解离，使聚合酶恢复活性，从而有效避免低温下的非特异性扩增。本品主要用于荧光定量PCR，尤其是Taqman探针法。
1个活性单位(U)定义为74℃下，30min内催化10nmol dNTP掺入酸不溶物所需的酶量。
| 组分 | 规格 |
| 热启动Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 200μL |
| 10×Taq Reaction Buffer | 5×1mL |
保存：-20℃
- 蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。
- 核酸内切酶活性检测：将5U本制品与200ng超螺旋质粒DNA在37℃下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
- 非特异性核酸酶活性检测：将5U本制品与15ng双链DNA片段在37℃温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。
- 宿主DNA残留检测：使用大肠杆菌16S rDNA特异性引物探针组，采用荧光定量PCR法检测5U本制品，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于1 copy。
- 探针法荧光定量PCR反应体系
成分 用量 终浓度 10×Taq Reaction Buffer 2μL 1× 热启动Taq DNA聚合酶(5U/μL) 0.15～0.2μL 0.75～1U/20μL dNTP (10mM) 0.4μL 0.2mM 正向引物(4μM) 1μL 0.2μM 反向引物(4μM) 1μL 0.2μM 探针(5μM) 1μL 0.25μM 模板DNA x μl 10～200ng/20μL ddH2O 至20μL - 引物推荐终浓度为0.2μM，效果不佳时可以在0.1～1μM进行调整；引物长度请设定18～25bp，GC含量为40%～60%。最佳效率的扩增目标片段一般为80～200bp，设计时应尽量避免发夹结构、二聚体等复杂结构，并尽可能横跨内含子区域。
- 探针终浓度推荐为0.25μM，效果不佳时可以在0.1～1μM进行调整。
- 模板添加量不应超过总反应体系的10%，推荐加样量为1～2μL。不同种类DNA模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的DNA模板添加量。
- 引物推荐终浓度为0.2μM，效果不佳时可以在0.1～1μM进行调整；引物长度请设定18～25bp，GC含量为40%～60%。最佳效率的扩增目标片段一般为80～200bp，设计时应尽量避免发夹结构、二聚体等复杂结构，并尽可能横跨内含子区域。
- 探针法荧光定量PCR反应程序
步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 5min 1 变性 95℃ 30 s 40 退火&延伸 60℃ 60 s
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