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高保真快速PCR预混液图片
产品货号:
ALH609
中文名称:
高保真快速PCR预混液
英文名称:
2×Fast&HiFi PCR MasterMix
产品规格:
1mL|5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品包含高保真DNA聚合酶、dNTPs和优化的反应缓冲液,浓度为2×。使用时只需加入模板、引物,并补足水至Mix终浓度为1×即可。本制品中的高保真DNA聚合酶来自于基因工程改造的pfu,大大提高了扩增速度、保真性和产量。本制品是非长片段超保真快速扩增的首选产品。本制品含红色示踪染料,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端,不需要加A头,可直接用平末端系列载体(货号ALH333、ALH335)克隆。




  • 扩增速度快:延伸速度可以达到2~4kb/min,是pfu的4~8倍。
  • 扩增产量高:一般PCR产物量比传统pfu产量高50%~100%。
  • 优异保真性:保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
  • 扩增长度指标和pfu一致,可以完全替代pfu进行快速高保真扩增,但不建议用于pfu无法扩增的长片段。
    • 以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物,以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。



组分1mL5mL
2×Fast&HiFi PCR MasterMix1mL5mL
说明书1份1份

保存:-20℃,有效期2年。


  • 扩增速度快,质粒和简单基因组等简单模板可以采用15~20秒/kb;复杂模板如人类基因组可以采用30~45秒/kb。
  • 对于GC含量很高的模板,预变性和变性温度可以提高到98℃。
  • 耐热性强,98℃对聚合酶的活性无改变。
  • 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时,可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%~8%,按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0~1.7M。并采用降落PCR(Touchdown PCR)。



  • 建议PCR反应体系
    成分25μL体系50μL体系终浓度
    2×Fast&HiFi PCR MasterMix12.5μL25μL
    Forward Primer(10μM)0.5μL1μL0.2μM
    Reverse Primer(10μM)0.5μL1μL0.2μM
    模板DNAx μLy μL
    ddH2O至25μL至50μL
    • 模板参考用量(50μL):质粒(0.1~10ng)、细菌基因组(10~100ng)、人类基因组(50~150ng)、cDNA(1~5μL)。
  • 建议PCR反应程序
    步骤温度时间循环数
    预变性95℃3min1
    变性95℃10sec30
    退火55℃10~15sec
    延伸72℃15~30sec/kb
    终延伸72℃2-5minutes1
    4~8℃Hold-

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