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染料法qPCR预混液图片
产品货号:
ALH533
中文名称:
染料法qPCR预混液
英文名称:
2×SYBR Green qPCR Mix
产品规格:
125T|500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real-Time PCR的专用试剂。已经将热启动HotMaster Taq DNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR Green I等试剂预混成一种适合Real-Time PCR反应检测用2×预混型试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。



本制品采用全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶,该酶不同于一般Hot-start酶之处在于,一般的Hot-start酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而Hotmaster Taq DNA聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭Hotmaster TaqDNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。




  • 本制品不含参比染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
  • 本制品含SYBR Green I强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。
  • 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。
  • 本制品含有4mM MgCl2(反应体系终浓度是2mM Mg2+),可用25mM MgCl2优化Mg2+浓度。



组分125T500T
2×SYBR Green qPCR Mix1.25mL4×1.25mL
说明书1份1份

保存:-20℃避光保存至少6个月,使用前充分融解混匀。短期使用可放在4℃,避免反复冻融。


  • 按下表加入各成分配制反应体系,操作请在冰上进行。
    成分20μL体系50μL体系终浓度
    2×SYBR Green qPCR Mix10μL25μL
    DNA Template1μL2μLas required
    Forward Primer (10μM)0.4μL1μL0.2μM each
    Reverse Primer (10μM)0.4μL1μL0.2μM each
    ddH2O至20μL至50μL-
  • PCR反应程序
    • 两步法
      温度时间循环数
      95℃2min1
      95℃15sec40
      60℃30~34sec
    • 三步法
      温度时间循环数
      95℃2min1
      95℃15sec40
      60℃15~20sec
      72℃20~30sec
    • 本制品兼容性强,适用于不同厂家、型号的荧光定量PCR仪,绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。在实际使用中可以根据机型推荐和具体情况对程序加以微调。一般来说,二步法扩增特异性高,三步法扩增效率高。如果融链曲线较差,可以尝试两步法扩增;若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。



  • 无信号值出现
    • 反应循环数不够。一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45cycles),但高于45个
      循环会增加过多的背景信号。
    • 检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束
      采集信号。
    • 引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。
    • 引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。
    • 模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
    • 模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
  • CT值出现过晚
    • 扩增效率低,反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;用三步法进行反应;适当降低退火温度;增
      加镁离子浓度等。
    • PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。
    • PCR产物太长。一般采用100~150bp的产物长度,一般不超过500bp。
  • 标准曲线的线性关系不佳
    • 加样存在误差,使得标准品不呈梯度。
    • 标准品出现降解。应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。
    • 引物或探针不佳。重新设计更好的引物和探针。
    • 模板中存在抑制物,或模板浓度过高。

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