产品货号:
ALH189
中文名称:
miRNA第一链cDNA合成试剂盒
英文名称:
microRNA first-strand cDNA synthesis kit
产品规格:
25T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用特殊优化预混合miRNA RT Enzyme Mix将Poly(A)加尾和反转录合并为一步完成,简化了操作步骤并提高Poly(A)加尾和逆转录效率,本试剂盒具有可从20pg~2μg的总RNA中有效制备miRNA对应的cDNA第一链。一次合成的cDNA可检测多个microRNA,节约了样品和成本。
本试剂盒基于Poly(A)加尾法原理,首先在miRNA 3'末端加Poly(A)尾,再使用Anchored oligo(dT)-universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终生成miRNA对应的cDNA第一链。
组分 | 规格 |
10×miRNA RT Enzyme Mix | 50μL |
2×miRT Reaction Mix | 250μL |
RNase-free H2O | 1mL |
保存:-20℃
- 本试剂盒须与miRNA荧光定量PCR检测试剂盒配套使用。
- 在反应中使用的total RNA必须包含有小分子RNA(miRNA)。此过程也可以使用富集的miRNA,单纯miRNA无法直接用分光光度计定量,建议直接加入2μL~5μL。可根据目的miRNA丰度决定加入量,但是对于低丰度miRNA样品而言(如血清血浆提取物),可直接加入最大体积8μL。
一、miRNA 3'末端进行Poly (A)加尾和逆转录反应(第一链合成)
- 解冻2×miRNA RT Reaction Mix并混匀,10×miRNA RT Enzyme Mix放于冰中备用,按下表配制反应体系。
成分 用量 终浓度 Total RNA x μL Up to 2μg 2×miRNA RT Reaction Mix 10μL 1× miRNA RT Enzyme Mix 2μL - RNase-free H2O 至20μL - - 10×miRNA RT Enzyme Mix最后加入。
- 10×miRNA RT Enzyme Mix非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心,并且避免吸头外壁沾附损失。
- 10×miRNA RT Enzyme Mix内酶都是过量的,即使每次按照1.8μL使用,也不影响使用效果。
- 10×miRNA RT Enzyme Mix最后加入。
- 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在42℃反应60min。
- 85℃加热5秒钟失活miRNA RT Enzyme Mix。合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存,也可以直接进行下游PCR或者荧光定量PCR检测。
二、进行荧光定量PCR
请参考miRNA荧光定量PCR检测试剂盒说明书进行。
- 使用本试剂盒得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时,可以根据实际情况选择使用量,对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,可根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(5~10倍或者100倍)后使用。如果发现有非特异扩增条带,或者融链曲线显示有非特异扩增,往往提示cDNA模板过量,可以尝试将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。
相关搜索:miRNA第一链cDNA合成试剂盒,miRNA反转录,miRNA逆转录,microRNA反转录,microRNA逆转录,第一链cDNA合成,cDNA第一链合成,Poly(A)加尾法,microRNA first-strand cDNA synthesis kit