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细胞融合(cell fusion)是两个或两个以上细胞融合并形成一个细胞过程。在自然情况下，体内、体外发生的细胞融合的现象称为自然融合；体外培养的细胞可用人工方法诱导相同或者不同细胞间发生融合，称为人工诱导融合。体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可以做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。bjbalb电诱导细胞融合试剂盒(Electrofusionof cell)是20世纪80年代发展起来的一项生物工程技术，其作用原理是先使细胞在在电场中极化成偶极子，并延电力线成串排列，用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜，促使细胞发生融合。该细胞融合方法具有无毒、融合频率高、易控制等优点。该试剂盒有效成分经严格无菌处理，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。

• BALB/C小鼠、SP2/0骨髓瘤细胞
  
• 离心管
  
• 离心机
  
• RPMI 1640培养基、胎牛血清
  
• 200目细胞筛
  
• 显微镜
  
• 细胞电融合仪
  
• CO₂培养箱
  
• 96孔、24孔培养板

• 应注意无菌操作，避免被微生物污染。
  
• 如需HAT选择系列产品，可选择A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

• 准备细胞：
  
  • SP2/0骨髓瘤细胞：融合前，提前1天将SP2/0骨髓瘤细胞传代，培养至其处于对数生长期。将该细胞收集于无菌离心管中，1000g离心8～10min，弃上清液。加入10mL无血清RPMI 1640培养基，将细胞沉淀悬浮起来备用。
    
  • 淋巴细胞：融合前，取经3次用目的抗原免疫的BALB/C小鼠脾脏，每次免疫间隔2～3周，最后一次免疫后3～4天处死小鼠，取出脾脏，加入10mL无血清RPMI 1640培养基，将细胞沉淀悬浮起来备用。
    
  • 饲养细胞：融合前，收集健康的BALB/C小鼠腹腔中的腹水，将腹水（巨噬细胞悬液）1000g离心8～10min，弃上清液。加入25mL HAT选择培养液（按HAT Media Supplement：含胎牛血清的RPMI 1640培养液=1：49配制），混匀，接种到96孔或24孔培养板。经培养形成的饲养层细胞，可以辅助新的融合细胞的生长。
• 细胞融合：
  
  • 将骨髓瘤细胞和淋巴细胞按5：1比例混合，细胞密度为1.5×10⁷个/ml，细胞悬液以1000g离心8～10min，弃上清液。
    
  • 将细胞沉淀加入5mL PM脉冲缓冲液，1000g离心8～10min，弃上清液。重复1次该步骤。
    
  • 用少量PM脉冲缓冲液重悬细胞沉淀，一般细胞浓度应达到2×10⁶个/ml，注入细胞电融合仪的电极小池或融合槽。注意：应根据不同体积的电极小池或融合槽加入细胞悬液，大多数细胞电融合仪的融合容积在20～4000μL之间。按如下条件电泳：交流电场频率1MHz，振幅250V/cm，时间30s。在显微镜下观察，看到80%的细胞已经形成珠串时，立即加穿孔电脉冲，其条件为：脉冲幅度5kV/cm，时间常数20ms，脉冲个数5，间隔1s。
    
  • 1000g离心8～10min，弃上清液。向细胞沉淀加入25mL HAT选择培养液，混匀，接种到96孔或24孔培养板，37℃ 5%CO₂培养12~24h。
• 筛选：细胞融合后12~24h，将细胞接种到HAT选择培养液中，细胞密度达到60～80%汇合率之间，容许细胞进一步生长，进行异核体筛选，4～14天后可观察到大集落的杂交瘤细胞克隆。结果：一般培养3～5天后即可见小克隆出现，杂交细胞较大，呈圆形且透明，其他细胞透光性差并逐渐死亡。当培养8～12天后，克隆可长至孔底面积的30～50%，此时可取培养上清液进行抗体检测。一旦检测到分泌预定抗体的克隆，应及时将阳性克隆转种24孔培养板进行扩大培养。