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本试剂盒采用SABC-FITC荧光和SABC-POD酶促双显色原理，可在同一张切片上用两套显示系统观察，适用于一抗来源为小鼠的免疫荧光/组化实验。DyLight是一种近年来被广泛应用的新型荧光染料，具有很好的光谱宽度、更强的荧光强度，更高的抗淬灭性和特异性，对pH不敏感、分子较小渗透性好等优势。DyLight 488最大吸收峰493nm；最大发射峰518nm。呈黄绿色。加入显色剂DAB显色后，染色呈棕黄色。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。

• 粘片剂APES或Poly-L-lysine。
  
• EDTA抗原修复液。
  
• 20mM PBS(pH7.2～7.6)：1L蒸馏水中加氯化钠9g，Na2HPO4·12H2O 7g，NaH2PO4·2H2O 0.5g。
  
• 10mM枸橼酸盐缓冲液：1L蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸(C6H8O7·H2O) 0.4g。
  
• DAB显色试剂盒。

• 石蜡片热修复染色步骤：
  
  • 石蜡切片，常规脱蜡至水。
    
  • 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
    
  • 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200～800)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • DAB显色：按照DAB显色试剂盒说明书配好即用型DAB后加至标本切片上，显色1～10分钟左右，水洗。
    
  • 根据需要用苏木素苏木素复染。水溶性封片剂封片。
    
  • 荧光显微镜观察。
• 石蜡片酶消化染色步骤：将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
  
• 石蜡切片酶不消化/修复程序：对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
  
• 细胞片的染色步骤：
  
  • 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
    
  • 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
    
  • 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比1:10)，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC-DyLight 488(参考效价1:200～800)或SABC-POD(参考效价1:100)，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • DAB显色：按照DAB显色试剂盒说明书配好即用型DAB后加至标本切片上，显色1～10分钟左右，水洗。
    
  • 根据需要用苏木素复染。水溶性封片剂封片。
    
  • 荧光显微镜观察。