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本试剂盒采用SABC-POD系统，适用于一抗类型为小鼠IgG的免疫组化实验。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，等电点pI为6.0～6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证SABC具有很高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便等优点。我公司采用特别方法制成的SABC不仅有很强的信号放大作用，而且非常稳定。

• 粘片剂APES或Poly-L-lysine。
  
• EDTA抗原修复液(10×)。
  
• 20mM PBS(pH7.2～7.6)：1L蒸馏水中加氯化钠9g，Na₂HPO₄·12H₂O 7g，NaH₂PO₄·2H₂O 0.5g。
  
• 10mM柠檬酸钠抗原修复液：1L蒸馏水中加枸橼酸三钠（C₆H₅Na₃O₇·2H₂O）3g，枸橼酸(C₆H₈O₇·H₂O) 0.4g。
  
• DAB显色试剂盒。

• 石蜡片热修复染色步骤：
  
  • 石蜡切片，常规脱蜡至水。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
    
  • 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
    
  • 滴加5% BSA封闭液37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素标记山羊抗小鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB或AEC。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素复染，染色时间为0.5～2min。脱水，透明。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。
• 石蜡片酶消化染色步骤：将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
  
• 石蜡切片酶不消化/修复程序：对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
  
• 细胞片的染色步骤：
  
  • 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
    
  • 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 3% H2O2去离子水室温孵育5～10min，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
    
  • 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液、胰蛋白酶、胃蛋白酶。蒸馏水洗2min×3次。
    
  • 滴加5% BSA封闭液37℃孵育30min，甩干，勿洗。
    
  • 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加生物素标记山羊抗小鼠IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 滴加SABC，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
    
  • 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB或AEC。自来水充分冲洗。
    
  • 苏木素复染，染色时间为0.5～2min。
    
  • 选用中性树胶，水溶性封片剂或其他适当的封片剂封片。