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本制品是一种采用了最新单一溶液TMB显色技术，通过辣根过氧化物酶(HRP)催化TMB显色，用于ELISA等的增强型显色液。本显色液也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。

通常的TMB显色试剂由多个组份组成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致检测结果不太稳定。本TMB显色液采用了最新的TMB显色技术，把所有的相关试剂全部配制在一个溶液中，仅由单一溶液组成，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。

TMB，即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB会产生可溶性蓝色产物。蓝色产物通常可以在370nm或620～650nm测定吸光度。


辣根过氧化物酶催化TMB显蓝色后可以使用百奥莱博的TMB终止液(不含硫酸)、TMB终止液(无腐蚀性)或自行配制的2M H2SO4终止反应。加入TMB显色终止液(不含硫酸)或硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度，吸光度会有显著升高(图1B)；加入TMB显色终止液(无腐蚀性)后，溶液保持蓝色不变，此时可在620～650nm测定吸光度。

组分	100mL	500mL
增强型TMB显色液(ELISA)	100mL	500mL
说明书	1份	1份

保存：2～8℃，避光，有效期1年。

• TMB对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
  
• 本制品为微蓝色透明溶液，如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成较深的蓝色，应该停止使用。

不同浓度辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗使用本制品的检测效果参见图1A。

图1.增强型TMB显色液(ELISA)的检测效果图。
A.本制品和TMB显色液(货号：YT076)的检测效果对比图。HRP标记山羊抗兔IgG用PBS稀释至图中所示浓度，各取20μL，加入200μL本制品，在5分钟时检测A370。从检测结果可知，HRP标记二抗浓度至少在0～0.02%范围内呈良好的线性关系，并且增强型TMB显色液(货号：YTC0384)的检测灵敏度比TMB显色液(货号：YT076)约高50%。
B.本制品直接检测A370和添加终止液后检测A450的检测效果对比图。图中可见添加终止液后检测A450的检测灵敏度更高一些。实测数据会因试剂、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

• 对于ELSIA检测：
  
  • 参考ELISA试剂盒的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5分钟。
    
  • 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100μL TMB显色液。
    
  • 室温避光孵育3～30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
    
  • 直接在370nm或620～650nm测定吸光度。或加入100μL TMB终止液(不含硫酸)或TMB终止液(无腐蚀性)，或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。
• 对于在96孔板内进行的其它适当检测(例如检测组织或细胞样品内源性的过氧化物酶)：
  
  • 直接在96孔板内每孔加入10～20μL样品。
    
  • 加入100μL TMB显色液。
    
  • 室温避光孵育3～30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
    
  • 直接在370nm或620～650nm测定吸光度。或加入100μL TMB终止液(不含硫酸)或TMB终止液(无腐蚀性)，或自行配制2M H2SO4终止反应，随后在相应波长测定吸光度。

• 背景显色太深。
  
  • 如果背景(没有样品的对照)显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
    
  • 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。
• 没有显色或显色太弱。
  
  • 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否可以被正常显色。
    
  • 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
    
  • 可以适当延长显色时间。
    
  • 如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。

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