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本制品主要用于免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀(Co-IP)，也可以用于抗体的纯化。Protein A+G Agarose适合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose单独可以免疫沉淀的抗体，包括mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，rabbit IgG，rabbit和goat polyclonal Abs，以及human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。

Protein A和Protein G都共价交联到4% agarose beads (Fast Flow)上，2mL Protein A+G Agarose中共含有约2mg重组的Protein A+G。2mL Protein A+G Agarose共可以结合约15mg human IgG。推荐的线性流速(Linear flow rate)为50-300cm/h。Protein A+G Agarose配制在TBS溶液中，2mL中共含有0.5mL Agarose beads。

• 请勿冷冻保存本制品。
  
• Protein A+G Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
  
• 从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。

• 免疫沉淀(IP)：
  
  • 蛋白样品的准备：
    
    • 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次，然后加入500μL至2mL细胞裂解液裂解细胞。可以使用我司的WB及IP细胞裂解液(货号：YT038)或各种RIPA裂解液(YT609、YT610、YT611或YT612)等进行细胞的裂解。
      
    • 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
      
    • 对于悬浮细胞，离心收集细胞后，PBS洗涤一次，然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
      
      • 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材，参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释，如果蛋白样品浓度过低，在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
  • 去除非特异性结合(可选做)：
    
    • 取200μL至1mL蛋白样品，蛋白量约为200μg至1mg，加入约1μg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20μL充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
      
    • 2500rpm(约1000g)离心5分钟，取上清用于后续的免疫沉淀。
      
      • 所谓种属相同的IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG，如无normal IgG可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein A+G Agarose的孵育，可以充分降低非特异性的结合，降低背景。
  • 免疫沉淀：
    
    • 加入0.2～2μg用于免疫沉淀的一抗，4℃缓慢摇动过夜。
      
    • 再加入20μL充分重悬的Protein A+G Agarose，4℃缓慢摇动1～3个小时。
      
      • 为方便后续的洗涤操作可以把加入充分重悬的Protein A+G Agarose的量调整为40μL。
    • 2500rpm(约1000g)离心5分钟，或瞬时高速离心，小心吸除上清，注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G Agarose。
      
    • 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次，裂解液或PBS的用量每次为0.5～1mL。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤3.c。
      
    • 完成最后一次洗涤后，去除上清，加入20～40μL 1×SDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀，瞬时高速离心把样品离心至管底。
      
    • 100℃或沸水浴处理3～5分钟，取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳，暂时不用的样品可以-20℃保存。
• 免疫共沉淀(co-IP)：
  参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。