产品目录

本试剂盒可用于检测以兔单克隆或多克隆抗体为一抗的免疫组化实验，检测原理基于高特异性高亲和力的链霉亲和素-生物素结合：已固定或培养细胞的抗原与一抗形成抗原抗体复合物，生物素化二抗特异性结合上述复合物，经辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素特异性识别生物素(即抗原所在位置)，最后经辣根过氧化物酶底物显色即可检测相应抗原。

本试剂盒可适用于多种类型样本，如石蜡包埋切片、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本等。

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• DAB是一潜在致癌物，使用时请注意自我防护。
  
• 检测样本时需同时做阴性对照和阳性对照。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 脱蜡水化：将石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡15min，重复三次。去除多余的液体后，依次置于无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡5min，蒸馏水(或自来水)冲洗5min。用PBS缓冲液(试剂A，将干粉溶解于2L去离子水中)冲洗切片5min，重复三次。
  
• 抗原修复：将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯(或修复盒)中的耐高温塑料切片架上，加适量修复液1×柠檬酸钠抗原修复液(试剂B，将100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成1×柠檬酸钠抗原修复液)，液面要浸过切片组织一定高度，将修复盒置于沸水中煮沸修复15min后取出玻片，自然凉至室温。用PBS缓冲液冲洗切片5min，重复三次。注意：抗原修复时，修复液务必保证切片始终浸泡在液体内，一般情况：修复液的量约为800mL/1架。
  
• 阻断内源性过氧化物酶：用吸水纸擦干玻片，免疫组化笔在组织周围画圈，滴加50μL内源性过氧化物酶阻断剂(试剂C)到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育30min，用PBS缓冲液冲洗切片5min，重复三次。
  
• 血清封闭：用吸水纸擦干玻片，滴加50μL正常山羊血清工作液(试剂E)，37℃封闭20min，以减少非特异性染色。
  
• 一抗孵育：用抗体稀释液(试剂D)将一抗原液稀释成工作液，用吸水纸擦干玻片组织周围的液体，滴加适量抗体工作液，置于孵育盒4℃孵育过夜或37℃孵育1h-2h。
  
• 复温：4℃过夜后从冰箱拿出样本，在室温下孵育15min复温(抗体孵育为4℃过夜选用此步骤，如室温孵育直接进入下一步清洗)。用PBS缓冲液冲洗切片5min，重复三次。
  
• 二抗孵育：吸水纸擦干切片后滴加50μL生物素标记的羊抗兔IgG(试剂F)，37℃孵育20min，用PBS缓冲液冲洗切片5min，重复三次。
  
• 三抗孵育：吸水纸擦干切片后滴加50μL辣根酶标记的链酶卵白素孵育(试剂G)，37℃孵育20min，用PBS缓冲液冲洗切片5min，重复三次。
  
• 显色：甩去PBS缓冲液，吸水纸擦干切片；每张切片滴加新鲜配制的DAB工作液50μL(试剂H：试剂I：试剂A=1:1:18比例配置)，孵育3～5min，光学显微镜下观察染色结果，切勿显色过深；显色后用自来水冲洗切片终止显色。
  注：
  
  • DAB显色液需现配现用，避光放置，且在30min内使用。
    
  • 可根据需要一次染多张切片，各种试剂量按照上述比例放大即可。
• 复染：滴加适量苏木素染液(试剂J)复染，孵育1～5min，自来水冲洗5min，滴加盐酸酒精分化液分化30sec，自来水冲洗。
  
• 脱水封片：将玻片依次置于70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇，各浸泡5min，再将玻片放入二甲苯中浸泡15min，重复三次。玻片取出来稍晾干，用中性树胶封片。
  
• 结果判定：
  在光学显微镜下对染色的切片观察并判断。苏木素染细胞核为蓝色，DAB显色的阳性表达为棕黄色。