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对目的蛋白进行检测分析时，总蛋白的提取至关重要，如蛋白提取不好会导致后续试验的不理想甚至失败，如：信号极弱或无杂交信号、背景高、非特异性条带多等.根据目标蛋白的类型和实验应用种类来选择合适的RIPA裂解液，才能最大程度地保证后续实验的成功。

RIPA裂解缓冲液(Co-IP/IP)对细胞有一定的裂解能力，能获得较多的胞浆蛋白，而对细胞核的裂解能力有限，不能完全裂解细胞核，因此获得的总蛋白适用于IP或CO-IP实验。

• 可很好的释放胞浆蛋白，部分释放膜蛋白和核蛋白。
  
• 经Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer，核蛋白与DNA还紧密结合在一起，离心后会造成核蛋白的丢失。
  
• 对于膜蛋白，Co-IP/IP RIPA Lysis Buffer的破坏力小，不能使膜蛋白与膜充分分离，故离心后造成膜蛋白的丢失。
  
• 在提取蛋白过程中，基因组DNA释放使得蛋白提取液变的十分粘稠，影响蛋白电泳和杂交效果。

• 对于培养细胞样品（0.5～10×10⁶个）：
  
  • 蛋白提取
    
    • 非磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向Co-IP/IP RIPA裂解液中，加入蛋白酶抑制剂混合物A (货号：MT0069)，使其最终浓度为1×。如250μL Co-IP/IP RIPA裂解液，加入2.5μL蛋白酶抑制剂混合物A，混合均匀，待用。
      
    • 磷酸化蛋白的提取：在使用前数分钟内向Co-IP/IP RIPA裂解液中，加入蛋白酶抑制剂混合物A、磷酸酶抑制剂混合物B、磷酸酶抑制剂混合物C (货号：MT0071)各2.5μL，使其最终浓度为1×。如250μL Co-IP/IP RIPA裂解液，加入2.5μL蛋白酶抑制剂混合物A、2.5μL磷酸酶抑制剂混合物B、2.5μL磷酸酶抑制剂混合物C，混合均匀，待用。
    注意：加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂后的Co-IP/IP RIPA裂解液可于-20℃保存2个月，性能不会有下降。
    
  • 离心收集细胞，弃上清。加入250μL上述配制好的裂解液，枪头或旋涡振荡混合均匀。冰上放置30min。
    
  • 样品裂解后，13000rpm离心5min，取上清，即为所提取蛋白。
• 对于组织样品：
  
  • 组织用研钵（或匀浆器）研磨充分至细小颗粒。
    
  • 按照每10mg组织加入250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当增加裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)，冰上放置30min。
    
  • 样品裂解后，13000rpm离心5min，取上清，即为所提取蛋白。
    
  • 提取完蛋白后可利用BCA蛋白定量试剂盒(货号：MT0072)测定蛋白浓度。如蛋白提取过程中加入了Benzonase核酸酶(货号：MT0068)消化核酸后，样品可以直接NanoDrop测定吸光值进行蛋白相对定量。