产品货号:
YT395
中文名称:
BalbRT cDNA第一链合成试剂盒
英文名称:
BalbRT First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)
产品规格:
10次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是一种采用了经过改造和优化的BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-),用于在总RNA、mRNA等RNA模板的基础上反转录产生cDNA第一链的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第一链合成所需的各种试剂。使用本试剂盒合成的第一链,可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
采用本试剂盒可以合成长达13kb的cDNA第一链。在采用BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)的情况下,由于缺失了RNase H,RNA和DNA双链复合物中的RNA不会被降解,这样反转录出来的cDNA的长度就会更长,并且产量更高。
试剂盒中提供了RNase Inhibitor,确保在反转录过程中的RNA不会被RNA酶所降解并取得较好的反转录效果。试剂盒还提供了Oligo(dT)18和random hexamer这两种引物,前者适合用于带有Poly(A)尾的mRNA的反转录,后者进行反转录时不需要poly(A)尾。也可以自行采用基因特异性引物进行cDNA第一链的合成。试剂盒中提供的Control Primer为17聚,即引物的长度为17个碱基。试剂盒中提供的Control RNA为带有3’poly(A)的1.1kb RNA。
组分 | 规格 |
BalbRT M-MuLV反转录酶(200U/μL) | 2000U |
Reaction Buffer(5X) | 50μL |
RNase Inhibitor(20U/μL) | 10μL |
dNTP Mix(10mM each) | 20μL |
Oligo(dT)18 Primer(0.5μg/μL) | 10μL |
Random Hexamer Primer(0.2μg/μL) | 10μL |
Control RNA(20ng/μL) | 6μL |
Control Primer(5pmol/μL) | 6μL |
DEPC-treated Water | 0.2mL |
保存:-20℃
- 对于GC含量比较高的RNA的反转录,试剂盒的使用说明中给予了特别说明,请予以关注。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- cDNA第一条链的合成(First-strand cDNA Synthesi):
- 参考如下表格设置反转录反应:
成分 用量 模板(后面4种任选一种) Total RNA 0.01~5μg 或Poly(A) RNA/mRNA 1~500ng 或Specific RNA 0.01pg~500ng 或Control RNA 2μL 引物(后面3种任选一种) Oligo(dT)18 Primer (0.5μg/μl) 1μL Random Hexamer Primer (0.2μg/μL) 1μL Gene specific primer 15-25pmol DEPC-treated Water To 12μL 70℃孵育5分钟,随后立即放置到冰浴冷却,4℃微离心 Reaction Buffer(5X) 4μL RNase Inhibitor(20U/μL) 1μL dNTP Mix (10mM each) 2μL BalbRT M-MuLV反转录酶 1μL 总体积 20μL - 轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀),随后离心沉淀液体。
- 如果使用Oligo(dT)18作为引物或使用基因特异性引物,在42℃孵育60分钟。如果使用random hexamer(随机六聚体)作为引物,先在25℃孵育10分钟,随后在42℃孵育60分钟。
注意:对于GC含量比较高的RNA模板的反转录反应,可以设置为45℃孵育60分钟。 - 70℃孵育10分钟以失活BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)并终止反转录反应。
说明:对于长片断的cDNA不推荐采用加热的方法失活BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-),这种操作可能会导致部分长片断DNA被剪切。 - 反转录产物可以直接用于后续的PCR等反应,也可以-20℃冻存以备以后使用。用于后续PCR反应时,如果PCR的反应体系为50μL,则推荐使用2μL反转录产物。
- 参考如下表格设置反转录反应:
- 其他用途请自行参考M-MuLV反转录酶(RNase H-)的相关文献资料进行。
- RNA反转录产物电泳观察不到。
反转录产物由于是从模板反转录而获得,而模板的量本身比较低,反转录的量通常还要少于模板量,因此通常RNA的反转录产物直接电泳观察是观察不到的。 - 反转录产物通过PCR扩增没有特异性条带。
PCR扩增没有获得特异性条带时建议先使用actin、GAPDH等作为内参进行PCR扩增,看是否可以成功扩增。如果可以成功,则说明PCR扩增体系没有问题,此时通常是目的基因的引物设计欠佳,当然也有可能是反转录产物质量欠佳。如果内参不能被很好地扩增,则有可能PCR体系存在问题或反转录产物质量欠佳。
相关搜索:BalbRT cDNA第一链合成试剂盒,第一链cDNA合成试剂盒,反转录试剂盒,逆转录试剂盒,RT试剂盒,BalbRT First Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)