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cDNA第一链合成试剂盒图片
产品货号:
WH0099
中文名称:
cDNA第一链合成试剂盒
英文名称:
BaiScript II RT Kit
产品规格:
25次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒适用于二级结构复杂和长链cDNA合成。提供了所有的用于cDNA第一链合成的试剂,其中的BaiScriptⅡ RTase为改良后的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV),改良后的新RTase具有更高的模板亲和力和更低的RNase H活性,因此使其在cDNA第一条链的合成过程中具有通读复杂二级结构模板和反转录长片段cDNA的能力。产品中配备的5×BaiScriptⅡ RTase Buffer经过精心的优化,既保证了新型RTase的高效酶活,又拓宽了RNA模板量的加入范围,使得反转录出来的cDNA具有更好的质量以便用于后续的实验分析。




  • 酶活效率高:高效的反转录酶活性,后续实验兼容性好。
  • 底物范围广:适用于所有RNA,尤其是具有复杂二级结构的RNA模板。
  • 反转片段长:cDNA第一链合成可以达到12kb。



  • cDNA第一链的合成;
  • cDNA文库的构建;
  • 一步法RT-PCR;
  • RACE分析。



cDNA第一链合成试剂盒(改良M-MLV)使用实例
本试剂盒对不同长度片段的反转录能力
实验材料:人类贴壁细胞总RNA。RT-PCR起始量:20μL反转录产物(50ng/μl)
实验结果:以上为1μg总RNA反转录后取2μL反转录产物进行10个长度不同的目标基因的扩增图
扩增体系:20μL
上样量:5μL
电泳条件:6V/cm,20min
各泳道图示:
1:产物长度120bp;2:产物长度1.0kb
3:产物长度2.5kb;4:产物长度3.2kb
5:产物长度4.6kb;6:产物长度6.8kb
7:产物长度7.6kb;8:产物长度8.9kb
9:产物长度10kb;9:产物长度12kb


组分25次100次
BaiScript II RTase (200U/μl)25μL100μL
Oligo (dT)15(10μM)60μL240μL
Random (10μM)60μL240μL
5×BaiScript II RTase Buffer150μL500μL
RNase-free ddH2O1mL2×1mL
Super Pure dNTPs (10mM,each)30μL120μL
RNasin (40U/μl)15μL2×30μL

保存:-20℃,有效期一年。


  • 用于cDNA合成反应的溶液试剂尽可能用DEPC进行处理,并在高压灭菌后使用。有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行滤除菌处理。
  • RNA样品要避免基因组DNA污染;
  • 避免反复冻融RNA,使RNA保持在冰浴中处融化状态;
  • 试剂盒中各组分成分应在-20℃保存;
  • 在使用Random Primer时,要注意随机引物量和总RNA量之间的关系,一般建议50ng随机引物/5μg总RNA。当提高Random/RNA的比率将会提高短片段(~500bp)cDNA的合成;而当降低Random/RNA的比率将会提高长片段cDNA的合成;
  • 如果模板RNA富含二级结构,可以先在65℃条件下处理5min;
  • 如果反转录中使用PCR下游引物,为了防止引物错配导致的非特异扩增,可以在50℃条件下进行反转录;
  • 在进行长片段扩增时,为了防止cDNA结果被破坏,建议以70℃下处理15min为酶灭活条件;
  • 当使用酶类时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部,由于酶粘度高,吸取时应慢慢吸取。
  • 如果要扩增长片段,需使用新鲜提取所得的完整性好、纯度高的RNA。



  • 将模板RNA在冰上解冻;引物、5×BaiScriptⅡRTase Buffer、Super Pure dNTPs混合液和RNase-free ddH2O在室温(15~25℃)条件下解冻,解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀,简短离心以收集残留在管壁的液体。
  • 按照下表的体系在冰浴的无核酸酶的离心管中配制混合液:
    表1:gDNA去除反应体系
    成分用量
    RNA1ng~2μg Total RNA
    或1pg~2ng Poly(A) mRNA
    Primer2μL Oligo-dT(10μM)
    或2μL Random Primer(10μM)
    或10~15 pmole基因特异性引物
    Super Pure dNTPs (10mM)1μL
    RNase-free H2O补充至14.5μL

  • 65℃孵育5min,然后置于冰上2min。
  • 在上述反应液的基础上继续加入下表所列的反转录组分:
    成分用量
    上述反应液14.5μL
    5×BaiScript II RTase Buffer4μL
    RNasin (40U/μl)0.5μL
    BaiScript II RTase(200U/μl)1μL

  • 如果引物为Random Primer则需将体系现在25℃下孵育10min,如果引物为Oligo-dT和基因特异性引物则不需要此步骤。
  • 42℃孵育60min。
  • 85℃加热5min(或70℃加热15min)终止反应,置于冰上进行后续实验或冷冻保存。

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