产品货号：
MT0125
中文名称：
带帽带尾mRNA合成试剂盒
英文名称：
T7 ARCA mRNA in vitro Synthesis Kit
产品规格：
10T|50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒可以快速的体外合成带ARCA帽结构和带Poly(A)尾的mRNA。通过T7 RNA聚合酶通过转录，将抗-反向帽类似物（ARCA）加到mRNA上，经DNase I短暂温育可以去除模板DNA，并在Poly(A)聚合酶的作用下，为加帽的mRNA加Poly(A)尾。
T7 RNA聚合酶识别T7 promoter（TTCTAATACGACTCACTATAGG）以方框中G碱基为起点开始转录，该试剂盒可以从少量样本得到高效转录，单次反应可获得>30μg的mRNA产物，转录长度可达4000nt以上。转录产物80%以上含有7-甲基鸟苷帽结构、Poly(A)尾长度>80nt。
本试剂盒合成得到的RNA适用于多种下游应用，如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义RNA及RNAi实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和RNA疫苗等。
大多数真核mRNA的高效翻译需要在5'末端有一个7-甲基鸟苷帽结构、3'末端有一个Poly(A)尾。
| 组分 | 10T | 50T |
| 5×ARCA/NTP mix | 40μL | 200μL |
| 5×T7 RNA Pol Buffer | 40μL | 200μL |
| T7 ARCA Enzyme Mix | 40μL | 200μL |
| 10×EPAP Reaction Buffer | 1mL | 1mL |
| Poly(A) Polymerase | 50μL | 250μL |
| RNase-Free DNase I | 20μL | 100μL |
| RNase-Free H2O | 1mL | 1mL |
保存：-20℃，避免反复冻融，有效期2年。
以PCR产物作为模板进行体外转录获得的RNA，应用本试剂盒进行加帽加尾，如图：
泳道1：体外转录获得的RNA，
泳道2：加帽加尾后产物。
- 按以下组分配制转录反应液
成分 用量 2×ARCA/NTP Mix 4μL 5×T7 RNA Pol Buffer 4μL RNase-Free DNA 0.1～1μg T7 ARCA Enzyme Mix 4μL RNase Free H2O 至20μL - 37℃反应1~2h，转录带帽RNA产量在20～30μg。
- 转录完毕后，向上述反应液中加入2μL RNase-Free DNase I，37℃孵育15min去除DNA模板。
- 进行加尾反应
- 按下表加入各成分配制加尾反应体系
成分 用量 上述转录产物 20μL 10×EPAP Reaction Buffer 3μL Poly(A) Polymerase 5μL RNase-Free H2O 22μL - 放置37℃反应30～60min完成加Poly(A)尾。
- 按下表加入各成分配制加尾反应体系
- 反应完毕后，可电泳检测或放置-80℃保存。或选用RNA快速纯化试剂盒进行转录RNA的纯化，以去除盐、NTP、蛋白等。
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