产品货号：
MT0007
中文名称：
血清/血浆microRNA反转录试剂盒
英文名称：
miR-Quant TaqMan microRNA cDNA Synthesis Kit For Serum/Plasma Sample
产品规格：
25μL×25T|25μL×100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用加A法进行反转录，加A法的反转录效率远高于茎环法，因此，采用该方法可极大的提高检测灵敏度（原理见图1）。该试剂盒操作简单，仅需要两步即可轻松完成miRNA的cDNA合成，合成的cDNA可用于所有miRNA的后续定量检测。反转录完毕后采用特异性的上游引物和接头引物进行PCR扩增，FAM标记TaqMan探针作为荧光报告基团进行定量检测。
本试剂盒专用于血清血浆miRNAs分子的反转录试验（不可用于组织和细胞），转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子（仅适用TaqMan miRNA定量PCR试剂盒，货号：MTTxxxxx）。
图1：TaqMan miRNAs定量检测原理
| 组分 | 25T | 100T |
| 5×TaqMan miRNA RT Solution A | 65μL | 250μL |
| 10×TaqMan miRNA RT Solution B | 65μL | 250μL |
| 10×PS TaqMan miRNA RT Primer | 65μL | 250μL |
| RNase-Free H2O | 1mL | 2×1mL |
保存：-20℃避免反复冻融，有效期2年
- 按以下组分在0.2mlEP管中配制反应液
成分 用量 血清血浆miRNA 10μL 5×TaqMan miRNA RT Solution A 2.5μL - 在PCR仪上按以下条件进行加A反应
温度 时间 37℃ 30分钟 85℃ 5分钟 - 反应完毕后，在上述12.5μL反应体系中加入如下试剂，并混合均匀。
成分 用量 10×PS TaqMan miRNA RT Primer 2.5μL 10×TaqMan miRNA RT Solution B 2.5μL RNase-Free H2O 7.5μL - 在PCR仪上按以下条件进行反转录反应
温度 时间 30℃ 5分钟 55℃ 1小时 95℃ 5分钟
获得的cDNA产物可用于多个目标miRNA的检测。通常取2μL即可用于TaqMan miRNA定量PCR试剂盒检测(货号：MTTxxxxx)，该试剂盒有一万余种，详细列表可查询。 - 利用TaqMan miRNA qPCR Kit对上述miRNA cDNA产物进行RealTime PCR检测。
内参基因可选择使用：
TaqMan hsa-miR16 miRNA定量PCR试剂盒(货号：MTT01511)；
TaqMan cel-miR-39 miRNA定量PCR试剂盒(货号：MTT01513)。
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