产品货号:
ME0002
中文名称:
原代细胞小RNA转染试剂
英文名称:
nFectPM Small RNA Transfection Reagent
产品规格:
0.1mL|0.5mL|1mL|1.5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是在nFect细胞株小RNA转染试剂的基础上加以改进推出的专门用于原代细胞小RNA转染的试剂。nFectPM可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA,可转染绝大多数原代细胞。
原代细胞的核酸转染都是个热点难题,市场还缺乏真正有效的商品化的原代细胞核酸转染试剂。nFectPM能够高效转染绝大多数原代细胞,获得比较理想的基因敲除效果。甚至对一些活体寄生虫幼虫,nFectPM也能获得较为理想的转染结果。对于大多数原代细胞,nFectPM的细胞转染阳性率都在80%以上,而转染细胞死亡率不到10%。nFectPM的使用也极其简便,先将sRNA与nFectPM室温混合,再将siRNA-nFectPM混合物直接加入含培养基的细胞,血清对转染效果没有影响,不必刻意添加或更换培养液。
- 原代细胞转染性能:细胞转染阳性率一般在80%以上,基因敲除效果明显,肝细胞Lamin A/C基因敲除效率在95%以上;
- 极低的细胞毒性:转染细胞死亡率不到10%,大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响;
- 转染细胞范围广,绝大多数原代细胞都能获得比较理想的转染结果。
组分 | 0.1mL | 0.5mL | 1mL | 1.5mL |
nFectPM原代细胞小RNA转染试剂 | 0.1mL | 0.5mL | 1mL | 1.5mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,避免反复冻融,有效期1年。
本说明书适用于24孔培养板的转染实验,其他规格的培养板的用量参照下面表格,表格给出的是每孔的用量与体积。
- 细胞接种:
转染前一天接种细胞,每孔500μL培养基,使细胞在转染时密度在30~50%,尽量不要使用抗生素。 - siRNA-nFectPM混合物准备:
- 12pmol siRNA用50μL无血清培养基稀释。
- 2μL nFectPM用50μL无血清培养基稀释。轻轻混匀,室温孵育5min。注意:确保在25min内执行第三步操作,不要过于延迟。
- 孵育5min后,将siRNA稀释液与nFectPM稀释液混合(总体积100μL)。轻轻混匀,室温孵育20min。
- 12pmol siRNA用50μL无血清培养基稀释。
- 将混合物加到培养的细胞内(完全培养基培养):
- 将100μL混合物加入培养孔内,培养孔内含有0.5mL培养的细胞。轻轻晃动培养板,混匀。
- 37℃培养18-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养4-6h时可以更换培养基,但不是必须。孵育时间的长短,取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。
- 将100μL混合物加入培养孔内,培养孔内含有0.5mL培养的细胞。轻轻晃动培养板,混匀。
- 转染实验优化:
为了提高转染效率,最好对转染条件进行优化,特别是首次使用。例如:24孔培养板,siRNA用量在6、12、18、24、30pmol (终浓度10~50nM)之间调整,nFectPM试剂用量在1.0~3.0μL之间调整。 - 转染实验要点:
- 转染过程尽量不要使用抗生素,否则会导致细胞死亡增加;
- 首次实验siRNA的用量设置在终浓度10nM、20nM、30nM、40nM、50 nM进行摸索,后续实验根据实验结果修改。
- 转染过程尽量不要使用抗生素,否则会导致细胞死亡增加;
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