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本制品主要采用相对定量qPCR来直接比较样本的平均端粒长度，即采用端粒重复序列（Tel）的拷贝数与基因组单拷贝基因（SCR）的拷贝数比值(T/S)作为端粒相对长度。单拷贝基因引物(SCR)特异性识别并扩增人类11号染色体上78bp长的区域。

端粒（Telomere）是由多个重复核苷酸元件(TTAGGG)所串联组成的一段真核细胞染色体末端的DNA序列，除了提供非转录DNA的缓冲物外，还能保护染色体末端免于融合和退化，保护染色体结构稳定和遗传完整。端粒是一个人老化速度的最重要和准确的指标，它的初始长度由遗传和环境因素决定，并且会随着时间的推移而减少。有研究表明，端粒长度与DNA修复、衰老、细胞凋亡及肿瘤发生等有密切的联系，因此，对于研究人员来说，准确而可重复地测量端粒长度尤为重要。

• 即开即用，用户只需要提供外周血DNA模板。
  
• 操作只需要半天，比Southern杂交检测法快3～5天时间。
  
• 无非特异性扩增。每组引物均已经过扩增曲线效率验证（E>98%，R²>0.99），熔解曲线分析以及凝胶电泳验证。
  
• 使用PCR扩增，几乎每个分子生物学实验都有相关设备，非常方便。
  
• 本制品足够100次/50样的染料法荧光定量PCR反应。
  
• 本制品只能用于科研。

• 推荐使用20μL体系以保证目的基因扩增的有效性和重复性。建立如下所述的反应体系。若要进行多个反应，可制备通用组分的预混液，在每管或每孔中加入合适的体积，然后加入特殊的反应成分（例如：模板）。
  

  成分	用量	终浓度
  2×SYBR qPCR MasterMix	10μL	1×
  端粒基因引物(10μM) 或 单拷贝基因引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
  模板DNA(0.5～5ng/μL)	1μL	-
  50×ROX染料(可选)	0.4μL/-	1×/-
  超纯水	至20μL	-

  
  
• 盖上或密封反应管/PCR板，轻轻混匀。可以稍微离心，确保所有组分都在管底。
  
• 将反应体系置于荧光定量PCR仪中，收集数据并分析结果。按下表所示设置您的PCR仪。
  三步法扩增程序：
  

  阶段	循环数	温度	时间
  预变性	1	95℃	1min
  变性	35～40	95℃	10sec
  退火		55℃	30sec
  延伸		72℃	45sec

  • 决定最佳退火温度的主要因素为引物长度及引物碱基组成。根据试剂盒端粒及SCR引物组的特性，我们建议退火温度设置为55℃。
    
  • 可根据选择的仪器在反应体系中加入ROX染料，将反应体系中的荧光信号标准化。下表所列为使用不同仪器操作时所需的ROX量（每50μL反应体系）：
    

    仪器	每50μL体系反应所需的ROX量
    ABI7300、7900HT、StepOne等	5μL
    ABI7500、7500Fast、ViiA7、Stratagene Mx3000、Mx3005P以及Mx4000等	1μL
    Roche仪器、Bio-Rad仪器，Eppendorf仪器等	无需添加