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本试剂盒适用于长度在20nt以上的单链DNA的环化，所得环状单链DNA可以用于RCA扩增。

• 即开即用，十分简单方便，用户不需要辛苦摸索条件。
  
• ssDNA的5'必须有磷酸基团，3'必须是羟基基团。
  
• 环化效率最高可以达到90%以上（ssDNA越长，效率越低）。
  
• 本制品对ssRNA也有环化能力，故模板中不得有RNA污染。

• 准备单链DNA模板：可以用自选的方法制备单链DNA模板，最简单的方式是直接人工合成单链DNA，但必须将5'端修饰为磷酸基团（合成DNA 5'端的默认基团是-OH）。如果单链DNA来源于其他反应体系，则最好电泳回收（如尿素-PAGE电泳）以便去除其他成分对环化反应的干扰。为了方便后续克隆，可以在待突变片段两端设计成专一的、不存在于其他位置的限制性内切酶位点。
  
• 设置单链DNA环化反应，在PCR管中按下表加入各成分：
  

  成分	样品管	阴性对照
  5'端磷酸化的单链DNA(终浓度为10pmol/μL)	5μL	5μL
  2.5×单链DNA环化预混反应液A	4μL	4μL
  20×单链DNA环化预混反应液B	0.5μL	0.5μL
  25×单链DNA环化酶	0.4μL	-
  超纯水	0.1μL	0.5μL

  
  
• 65℃保温1小时。需要加热盖，否则反应体系中的水会蒸发。
  
• 如果需要去除没有环化的单链DNA，可以直接加入10U的Exonuclease 37℃酶切15分钟。本试剂不含相关成分。也可以加入本公司的线性DNA清除剂（需另购）。
  
• 90℃加热10分钟灭活反应体系。如果不能加热，可以加入自备的10mM EDTA。