产品货号:
KD2207
中文名称:
YPD Plus液体培养基
英文名称:
YPD Plus Liquid Medium
产品规格:
50mL|100mL|250mL|500mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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用LiAc转化法进行酵母转化时,通常会通过加入Carrier DNA,选用对数期的酵母菌,以及优化质粒DNA的质量和浓度等方法来提高转化效率。在完成转化操作后,将转化产物用YPD Plus Liquid Medium重悬培养30~60分钟,有助于酵母细胞复苏,可以有效提高转化效率50~100%。适用于转化酵母菌株Y2HGold、AH109或Y187等,尤其适合对转化效率要求更高的文库转化。
我公司推出的三款转化试剂盒,转化效率为:经典转化Kit(KD0256)≈Super转化Kit(KD2195)>快速转化Kit(KD2251),其中经典转化Kit转化效率可达103~105 cfu/μg,快速转化Kit转化效率可达经典转化效率的50~80%,转化产物增加YPD Plus复苏培养步骤,会在此基础上显著增加转化效率。
组分 | 50mL | 100mL | 250mL | 500mL |
YPD Plus Liquid Medium | 25mL×2 | 25mL×4 | 25mL×10 | 25mL×20 |
说明书 | 1份 |
以经典转化方法为例,参考KD0256
- 质粒转化:
- 在含有约1μg质粒的1.5mL无菌离心管中,加入5μL预变性的Carrier DNA(KD2196),50μL酵母感受态细胞,350μL LiAc/PEG3350混合液(KD0803)轻柔混匀。
- 30℃水浴或者金属浴30min,每10min轻柔上下颠倒混匀一次。
- 每管加入20μL DMSO,轻柔上下颠倒混匀。
- 42℃水浴热激15min,每5min轻柔上下颠倒混匀一次。
- 3,000rmp离心5min,弃掉上清。
- 菌体沉淀用1mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮,30℃摇床震荡培养30~60min。
- 3,000rmp离心5min,弃掉上清,加入1mL无菌0.9% NaCl重悬菌体。
- 分别稀释10倍,100倍后涂布于相应的缺陷型培养基平板上。
- 平板倒置30℃恒温培养3~5天。
- 在含有约1μg质粒的1.5mL无菌离心管中,加入5μL预变性的Carrier DNA(KD2196),50μL酵母感受态细胞,350μL LiAc/PEG3350混合液(KD0803)轻柔混匀。
- 文库转化:
- 在含有约5~15μg文库质粒的15mL无菌离心管中,加入20μL预变性的Carrier DNA,600μL酵母感受态细胞,2.5mL LiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。
- 30℃水浴45min,每10min轻柔上下颠倒混匀一次。
- 每管加入160μL DMSO,轻柔上下颠倒混匀。
- 42℃水浴热激20min,每5min轻柔上下颠倒混匀一次。
- 3,000rmp离心5min,弃掉上清。
- 菌体沉淀用3mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮,30℃摇床震荡培养90min。
- 3,000rmp离心5min,弃掉上清,根据实验需求加入相应体积的无菌0.9% NaCl重悬菌体。
- 涂布于相应的缺陷型培养基平板上。
- 平板倒置30℃恒温培养3~5天。
- 在含有约5~15μg文库质粒的15mL无菌离心管中,加入20μL预变性的Carrier DNA,600μL酵母感受态细胞,2.5mL LiAc/PEG3350混合液轻柔混匀。
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