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IgG Fab切割酶（FabCutter I）是一种新型的高特异性高活性Fab切割酶，能对人、鼠、绵羊、山羊等物种不同亚型的免疫球蛋白IgGs进行快速单位点酶切。该酶的酶切位点位于免疫球蛋白IgG铰链区的上方，酶切产物为Fab片段和二聚体Fc片段。与木瓜蛋白酶，无花果蛋白酶，胃蛋白酶等相比，FabCutter I具有酶切位点单一，切割快速等优点。

FabCutter I酶切反应：在反应缓冲液（10mM Tris,150mM NaCl,2mM DTT,pH7.4）中添加一定量的人IgG1和FabCutter I，37℃经过1小时反应后用15%SDS-PAGE胶检测酶切效果。
1：Human IgG
2：Human IgG + FabCutter I
M：Protein Marker

组分	1000U	5000U
FabCutter I	1000U	5000U
Human IgG	70μg	70μg

保存：-20℃


10mM Tris,150mM NaCl pH7.4的溶液经0.2μm无菌过滤后冻干。

• 溶解前低速离心，使冻干粉末聚集于管底。
  
• 用无菌ddH₂O溶解，1000U酶加入20μL无菌ddH₂O，5000U酶加入100μL无菌ddH₂O，配制成酶活性为50U/μL的溶液。
  
• 低速离心，使溶液汇聚于管底。

在10mM Tris,150mM NaCl,2mM DTT,pH7.4的反应体系内，37℃反应1小时，一个单位的酶能将1μg的人源IgG切割95%以上。


经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。


FabCutter I基因克隆自于酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)，通过大肠杆菌表达，经多步纯化获得。


FabCutter酶切体系缓冲液的最适pH值为6.5～8.0（表一），最适反应温度为37℃，另外该酶发挥活性需要还原剂（表二）。

表一：可供选择的反应缓冲液及pH

兼容Buffers	pH
PBS	6.5-8.0
Tris Buffer	7.0-8.0
Sodium Acetate Buffer	6.5*

注^*：pH在6.5以下要增加酶的用量。

表二：可供选择的还原剂

还原剂	浓度(mM)	pH值
DTT	1～5	6.5～8.0
TCEP	1～5	6.5～8.0
Cysteine	50～100	6.5～8.0
Cysteamine	50～100	6.5～8.0
Mercaptoethanol	50～100	6.5～8.0

• 按照溶解说明将冻干粉溶解，配制成为50U/μL的溶液。
  
• 待酶切的抗体溶解在反应缓冲液里，建议浓度为0.5～10mg/mL。
  
• 按照1U酶切1μg IgG的量将酶加到反应缓冲液里，加入还原剂激活酶的切割反应，通常在中性pH条件下加入1～5mM DTT或者TCEP。
  
• 37℃酶切1个小时，取部分样品跑SDS-PAGE检测切割效果。
  注：可使用本品中的Human IgG抗体做为底物测试酶切效果，用70μL ddH₂O配制成1mg/mL的蛋白溶解，取50μL加入1μL的酶。酶切前后取样跑SDS-PAGE。

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