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本制品是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，用于稳定、高效、便捷地从大肠杆菌中提取小量质粒的试剂盒。所得的质粒可直接用于细胞转染、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录、转化细菌、内切酶消化等实验。

本试剂盒具有抽提效果稳定、纯度高、操作灵活便捷等优点。本试剂盒的质粒抽提体系经过反复测试和优化，能从2～3mL过夜培养的大肠杆菌中抽提得到约10～15μg高拷贝质粒。最快约20分钟内即可完成质粒抽提。按照标准的操作步骤，本试剂盒适用于1～5mL过夜培养菌液的质粒抽提。由于磁珠的使用量可灵活调节，如进行中量质粒的提取，只需将抽提体系按比例放大即可，例如放大1倍。和传统的抽提方法相比，本试剂盒操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂。

目前质粒抽提的方法主要为柱纯化法，该方法通常需要反复离心，或者需要特殊的抽滤装置，而且柱纯化过程中的纤维切割对质粒的超螺旋状态有一定的影响。而磁珠法条件温和，整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作，而以简单的磁铁吸附所代替，因而确保了操作的快速和便捷。

本试剂盒的原理和主要操作过程如图1所示。利用碱裂解法使质粒充分释放，再与磁珠特异性结合，在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，经洗涤充分去除杂质，最后用洗脱液将质粒从磁珠上洗脱下来，即可获得高质量的质粒样品。

• BalbMag磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。
  
• 需自备无水乙醇和磁分离装置。
  
• 第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到悬浮液中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。
  
• 第一次使用前在每瓶洗涤液中加入指定量的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
  
  • 每瓶30mL洗涤液第一次使用前加入45mL无水乙醇；每瓶50mL洗涤液第一次使用前加入75mL无水乙醇。
• 磁珠在静置后会发生沉降，使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。
  
• 磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。
  
• 请使用推荐的菌液量。如果菌液量过大，可能造成磁珠聚集，会影响洗涤进而影响抽提获得的质粒纯度。发生磁珠聚集时，洗涤时需尽量分散磁珠，这样可有效改善抽提效果。如果发生磁珠聚集现象，建议在后续实验中适当减少菌液用量。
  
• 温度较低时，裂解液与结合液可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，可置于37℃水浴加热溶解，混匀后使用。
  
• 裂解液请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡，使用完毕后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。
  
• 本制品适用于手工抽提，也可用于工作站或核酸自动提取仪。
  
• 抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也会因菌种不同等原因而略有波动。
  
• 裂解液、结合液及溶液IV对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。

• 取1.5mL过夜培养大肠杆菌，5000×g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次，每管共收集3mL菌液的沉淀。
  
  • 通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2～4。建议5000×g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充分可以适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入悬浮液后散开沉淀。直接倒掉上清，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。如果细菌密度明显偏低，可考虑使用更多菌液，例如2次离心后再加入1.5mL菌液重复收集1次。对于高拷贝质粒所用菌量一般不宜超过3mL，对于低拷贝质粒所用菌量一般不宜超过5mL。过量的细菌会导致后续的裂解不充分。如果需要的质粒量比较少，也可以仅离心收集1.5mL菌液。
• 每管加入200μL悬浮液重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。
  
  • 确保悬浮液中已经添加RNase A。涡旋震荡使菌体完全分散。对着光亮处观察应呈均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。也可以用移液枪吹打使沉淀逐渐散开或用手指把沉淀弹开。
• 每管加入200μL裂解液，轻轻颠倒离心管4～6次，使细菌完全裂解，溶液透明。
  
  • 切勿涡旋震荡！剧烈操作会导致基因组DNA断裂，使最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4～6次后，溶液应变得透明，无团块或絮状物。如果步骤2中加入悬浮液后细菌没有完全散开，颠倒4～6次后可能还会有团块或絮状物。遇到有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3～5次，再室温放置2～3分钟，但总裂解时间不可超过5分钟。
• 每管加入200μL结合液，随即颠倒离心管4～6次混匀，可见白色絮状物产生。最高速(13000rpm左右)室温离心10分钟。
  
  • 切勿涡旋震荡！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。如果对于质粒的纯度要求不高，可以把离心时间缩短为3～5分钟，确保上清和沉淀适当分开即可。
• 将离心后的上清吸入或倒入新的1.5mL离心管内，加入50μL BalbMag磁珠悬液(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置3～5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  
  • 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
• 加入750μL洗涤液，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净残液。
  
  • 如果离心管内盖有磁珠，可按住离心管整体上下颠倒两次，使磁珠被完全吸附，然后弃去上清。
• 加入450μL洗涤液，重复6的操作，最终尽量吸净残留液体。
  
• 将离心管置于37℃鼓风烘箱5分钟，或室温放置5～10分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
  
• 加入50～100μL洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3～5分钟，其间甩动离心管1～2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20℃保存。所得溶液即为抽提获得的高纯度质粒。
  
  • 为提高样品浓度，也可适当减少洗脱液用量至50μL。约50～55℃洗脱比室温洗脱效率略高。