高通量高纯质粒提取试剂盒(1～1.3mL，微板吸附法)

产品货号：

WH0155

中文名称：

高通量高纯质粒提取试剂盒(1～1.3mL，微板吸附法)

英文名称：

96wells Mini Plasmid Extraction Kit(1-1.3mL)

产品规格：

4×96T|24×96T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒通过96孔吸附板特异性地结合溶液中的质粒DNA。96孔吸附板中采用的硅基质材料为本公司新型材料，能够高效、专一的吸附质粒DNA，可去除蛋白及其他杂质，从而保证提取质粒的纯度。无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂。

本试剂盒每孔可处理1.3mL高拷贝质粒菌液，从中可快速提取多至5～10μg质粒DNA（产量与质粒拷贝数、细菌状态等因素有关）。提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如酶切、测序、文库筛选、连接和转化等。

提取速度快。
配备了独特的IndRed试剂，可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度，确保得到高效率、高纯度的质粒DNA。
纯度高：可直接用于下游实验。
可用于高通量自动化核酸提取工作站。

组分	4×96T	24×96T
平衡液BL	240mL	3×500mL
溶液P1	125mL	3×240mL
溶液P2	125mL	3×240mL
溶液P3	160mL	4×250mL
去蛋白液PD	240mL	3×500mL
漂洗液PW	3×50mL	2×500mL
洗脱缓冲液TB	60mL	240mL
IndRed	700μL	4×1mL
RNase A (10mg/mL)	1.25mL	6×1.25mL
半裙边96孔吸附板CP3	4个	24个
半裙边96孔过滤板)	4个	24个
96孔深孔板	16个	96个
250mL试剂瓶	-	1个
封口膜	16张	96张
透气膜	5张	25张

该试剂盒置于室温(15～25℃)干燥条件下，可保存15个月，若溶液产生沉淀，使用前应可在30℃水浴中预热10min以溶解沉淀。溶液P1加入RNase A后，应置于2～8℃保存，可稳定保存6个月。单独包装的RNase A可在室温保存15个月。

注意事项

96孔板细菌培养方法：将含相应抗生素的培养基加入96孔深孔板中，每孔添加1.0～1.3mL培养基且挑取单克隆摇菌，加盖透气膜封板以防污染，在220～280rpm 37℃条件下培养20～24h。
溶液P1使用前先加入RNase A （请分批配制，每125mL P1加入1.25mL RNase A （10mg/mL），可用于4板提取反应），混匀，置于2～8℃保存。
每次使用前取50mL漂洗液PW并加入200mL无水乙醇摇匀后使用。
使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可置于37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。溶液P2和P3使用后应立即盖紧盖子。
所有离心步骤均为室温下进行离心。
提取的质粒量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关。
实验前使用平衡液处理吸附板，可以充分激活硅基质膜，提高得率。
用平衡液处理过的吸附板最好当天使用，放置时间过长会影响提取效果。

IndRed使用方法：
IndRed是一种颜色指示剂，用以指示整个操作的正确性，不影响任何下游实验且对人体无害。为可选试剂，客户根据需求选择是否添加。
若选择添加，则在使用之前按IndRed:P1=1:200进行添加，颠倒混匀至完全匀相。在使用时添加IndRed的P1溶液为红色；添加P2之后红色完全变为紫色说明充分裂解；再添加P3溶液之后匀相状态为黄色说明中和复性充分。

用户可以选择离心法或负压法。

一、离心法

平衡96孔吸附板：将96孔吸附板CP3和96孔深孔板叠放在一起，向吸附板中每孔加入500μL的平衡液BL，3600rpm(~2130×g)离心3min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。（请使用当天处理过的吸附板）。
集菌步骤：向一个新的96孔深孔板中添加1.0～1.3mL摇好的菌液（或者取摇好菌液的96孔板），加盖封口膜，3600rpm(~2130×g)离心10min收集菌体，倒掉培养基，倒扣于吸水纸上除去残留的培养基（如果菌体浓度较低，可以重复集菌一次）。
向每孔收集好的细菌培养物中加入250μL溶液P1 (请先检查是否已加入RNase A)，加盖封口膜，使用漩涡混合器彻底悬浮菌体。
注意：若溶液P1添加IndRed试剂，则此时为红色。
揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入250μL溶液P2，加盖新的封口膜，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解，瞬时离心使封口膜上的水珠落回板中。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，若使用IndRed试剂，完全混匀时颜色为紫色，若裂解不充分会有部分红色残留。混匀后菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。
揭去封口膜，向96孔深孔板中每孔加入350μL溶液P3，加盖新的封口膜，立即温和地上下翻转6～8次使其充分混匀。
注意：溶液P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。若使用了IndRed试剂，完全混匀应从紫色变为黄色。
将96孔过滤板和一个新的96孔深孔板叠放在一起，取750μL上步得到的裂解溶液转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750μL），3600rpm(~2130×g)离心5min。
将过滤液全部转入第1步平衡好的96孔吸附板CP3中（96孔吸附板CP3叠放在收集废液的96孔深孔板上），3600rpm(~2130×g)离心5min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μL去蛋白液PD，3600rpm(~2130×g)离心5min，倒掉深孔板中的废液，将吸附板重新放在深孔板上。
注意：如果宿主菌是end A^＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。
如果宿主菌是end A^－宿主菌（DH5α，TOP10等），这步可省略。
向96孔吸附板CP3每孔中加入700μL漂洗液PW （请先检查是否已加入无水乙醇），3600rpm(~2130×g)离心5min，倒掉收集板中的废液。
重复操作步骤9。
将96孔吸附板CP3叠放在96孔深孔板上，置于3600rpm(~2130×g)离心10min，目的是将吸附板中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
将吸附板CP3放入新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80～100μL洗脱缓冲液TB或ddH2O(pH≥7.5)，室温放置5～6min，3600rpm(~2130×g)离心10min将质粒溶液收集到收集板中。
注意：通常100μL的洗脱液在洗脱后能回收到平均55μL的DNA产物。为增加核酸的得率，可以适当增加洗脱液的体积（比如采用120μL洗脱液进行洗脱）。此外，洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

二、负压法

平衡96孔吸附板CP3：将96孔吸附板CP3放入负压装置中，每孔加入500μL的平衡液BL，开启并调节负压，抽掉吸附板中的溶液。（请使用当天处理过的吸附板）
以下步骤同离心法中的第2～5步骤操作方法。
接离心法第5步骤之后，将96孔过滤板和第1步平衡好的96孔吸附板CP3叠放后置于负压装备上，过滤板每一个孔需对应吸附板的每一个孔。
注意：此步操作应按照各种品牌的负压装置要求进行操作。
取上步得到的裂解溶液750μL左右，转入对应的96孔过滤板中（过滤板的承载量为750μL），调节负压抽干溶液。
可选步骤：向吸附板CP3每孔中加入500μL去蛋白液PD，调节负压抽干溶液。
注意：如果宿主菌是end A^＋宿主菌（TG1,BL21,HB101,JM系列等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，强烈推荐采用此步。如果宿主菌是end A^－宿主菌（DH5α,TOP10等），这步可省略。
向96孔吸附板CP3每孔中加700μL漂洗液PW，调节负压抽干溶液。
重复步骤6。
使用最大负压继续抽10min，以彻底抽干吸附材料中残余的漂洗液。若柱尾仍然含有水珠用吸水纸吸干即可。
将吸附板CP3放入一个新的96孔深孔板中，使用排枪向96孔CP3吸附膜的中间部位悬空滴加80～100μL洗脱缓冲液TB或ddH20(pH≥7.5)，室温放置5～6min，3600rpm(~2130×g)离心10min将质粒溶液收集到深孔板中。

DNA浓度及纯度检测

DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1相当于大约双链DNA 50μg/mL、单链DNA 40μg/mL。
OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7～1.9。

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