土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

产品货号：

WH0008

中文名称：

土壤DNA提取试剂盒（离心吸附柱法)

英文名称：

Extraction kit for genomic DNA from soil

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本试剂盒采用独特的脱腐缓冲液系统，可以将土壤样本中的腐殖酸尽可能的去除，并且配有的研磨珠可有效破碎土壤样本中的各种复杂成分，保证从土壤中提取基因组DNA的完整性。使用本试剂盒回收的DNA杂质少，完整性好，可直接用于PCR、酶切等其它分子生物学下游实验。

产品特点：

操作便捷：能够集中在相对较短时间内完成实验操作。
高纯度：与离心柱法纯化相结合，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

适用范围：

本试剂盒适用于花坛土、花盆土、农田土、山林土、淤泥、红土、黑土、粉尘等多类土壤环境样本的提取。

产品组成：

组分	规格
缓冲液SA	45mL
缓冲液SC	5mL
缓冲液HA	15mL
缓冲液HB	15mL
缓冲液GF	70mL
漂洗液PWS	15mL
研磨珠	15g
洗脱缓冲液TE	15mL
吸附柱CB3	50个
收集管(2mL)	50个

保存：室温，有效期1年。

注意事项：

新采取的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。
所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。
漂洗液PWS使用前请参照瓶上标签加入无水乙醇。
过量的DNA可能抑制下游PCR反应，遇到这种情况建议将DNA模板进行稀释后试用。
若溶液产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀，不影响效果。

使用方法：

取750μL缓冲液SA和0.25g研磨珠至2mL离心管中。
在上述2mL离心管中加入土壤样本0.25g，涡旋混匀15sec。
向样本中加入60μL缓冲液SC，涡旋振荡10min至样本混匀。
使用前检查缓冲液SC是否有沉淀，若有沉淀，请在37℃加热至完全溶解后使用。
12000rpm（~13400×g）离心1min。转移上清液(约500μL)至新的2mL离心管。
加入250μL缓冲液HA，涡旋5sec，4℃放置5min。
12000rpm离心1min。转移上清至新的2mL离心管，加入200μL缓冲液HB混匀，4℃放置5min。
转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
12000rpm离心1min。转移上清液至新的2mL离心管，加入1200μL缓冲液GF颠倒混匀。
转移上清时不要移走沉淀，否则可能降低DNA纯度。
取上一步所得溶液700μL加入到一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
吸附柱最大容量为700μL，请分多次过柱。
向吸附柱CB3中加入500μL漂洗液PWS (用前请加入无水乙醇)，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
向吸附柱CB3中加入500μL 70%乙醇，12000rpm离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
12000rpm离心2min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～100μL洗脱缓冲液TE，室温放置2～5min，12000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。
为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2min，12000rpm离心2min。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

附录参考：
DNA浓度及纯度检测：

得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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