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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需苯酚或氯仿抽提，可获得最大为50kb的DNA片段，同时对100bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

• 向Proteinase K中加入1.25mL Proteinase K保存液使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
  
• 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
  
• 第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
  
• 使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

• 取一段大鼠或两段小鼠长度为0.4～0.6cm的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管（自备）中。加入180μL Buffer GTT，振荡混匀。
  注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
  
• 加入20μL Proteinase K，涡旋振荡，彻底混匀。
  
• 置于56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化6～8小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
  注意：
  
  • 如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入20μL Proteinase K消化，不会影响后续操作。
    
  • 如需去除RNA，在上述步骤完成后加入4μL 100mg/mL的RNase A溶液(货号：WE0225)，震荡混匀，室温放置5～10分钟。
• 12000rpm (~13400×g)离心1分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管（自备）中。
  
• 加入200μL Buffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入200μL无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
  注意：
  
  • 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
    
  • 如果多个样品一起操作，Buffer GL和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
    
  • 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
• 将步骤5中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
  
• 12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
  注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR等）。
  
• 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
  注意：
  
  • 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
    
  • 离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
    
  • 用另外的50～200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
    
  • 如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于200μL，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μL Buffer GE或灭菌水洗脱。
    
  • 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。