产品货号：
QN2052
中文名称：
革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称：
Genomic DNA extraction kit for Gram-positive bacteria
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成：
储存条件：15～25℃干燥保存，有效期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1．取细菌培养液1ml，12000rpm 离心1min.，尽量吸除上清。
2．向菌体中加入200μl终浓度为20mg/ml的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入缓冲液20mM Tris(pH8.0)；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃处理30min以上。(如果需要去除RNA，可加入20μl RNase A,100mg/ml溶液)
3．向菌体中加入200μl溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20μl的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30～60min。(可选作，如做第3步操作，可以将第2步离心后的沉淀用于后续实验)。
4．向管中加入20μl的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30～60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。
5．向管中加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15～30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致 DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。
6．向管中加入200μl无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。
7．12000rpm离心2min. 弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8．向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9．向吸附柱中加入600μl漂洗液，12000rpm离心lmin，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10．12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11．将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50～200μl经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
12．离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。
注意事项:
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3．如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。
4．洗脱缓冲液的体积最好不少于50μl，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5．DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
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试剂盒组成：
| 组分 | D1650-50T | D1650-100T |
| 溶菌酶 | 3ml | 5.5ml |
| RNase A | 1m1 | 1m1×2 |
| 蛋白酶K | 1ml | 1m1×2 |
| 溶液A | 10ml | 20ml |
| 溶液B | 10ml | 20ml |
| 漂洗液 | 15m1 | 15ml×2 |
| 洗脱液 | 15m1 | 30m1 |
| 吸附柱 | 50个 | 100个 |
| 收集管 | 50个 | 100个 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件：15～25℃干燥保存，有效期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1．取细菌培养液1ml，12000rpm 离心1min.，尽量吸除上清。
2．向菌体中加入200μl终浓度为20mg/ml的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入缓冲液20mM Tris(pH8.0)；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃处理30min以上。(如果需要去除RNA，可加入20μl RNase A,100mg/ml溶液)
3．向菌体中加入200μl溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，向悬浮液中加入20μl的RNase A(10mg/ml)和50ul溶菌酶，充分颠倒混匀，室温放置30～60min。(可选作，如做第3步操作，可以将第2步离心后的沉淀用于后续实验)。
4．向管中加入20μl的蛋白酶K(10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30～60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。
5．向管中加入200μl溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15～30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致 DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。
6．向管中加入200μl无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。
7．12000rpm离心2min. 弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8．向吸附柱中加入600μl漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9．向吸附柱中加入600μl漂洗液，12000rpm离心lmin，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10．12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11．将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50～200μl经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
12．离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm 离心2min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。
注意事项:
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。
3．如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。
4．洗脱缓冲液的体积最好不少于50μl，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
5．DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7～1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
相关搜索：革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒