产品货号:
QN0899
中文名称:
去内毒素质粒大量提取试剂盒(50~100mL)
英文名称:
Free Endotoxin Plasmid DNA Extraction Maxi Kit(50-100mL)
产品规格:
10T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。百奥莱博研制的内毒素清除剂,可最大限度地除去内毒素。从50~100mL大肠杆菌LB培养液中,可快速提取200~300μg高纯度高拷贝的质粒DNA,提取率达85~90%。使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高,可直接用于细胞转染等要求较高的实验,以及其他各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
试剂盒组成:
注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2~8℃保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
保存:常温干燥保存,复检期为一年。
注意事项:
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试剂盒组成:
组分 | 规格 |
RNase A | 1mL |
内毒素清除剂 | 100mL |
溶液P1 | 40mL |
溶液P2 | 40mL |
溶液P3 | 40mL |
结合液 | 120mL |
漂洗液 | 15×2mL |
洗脱液 | 30mL |
吸附柱 | 10个 |
收集管 | 20个 |
说明书 | 1份 |
注意:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的RNaseA全部加入),混匀,置于2~8℃保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
保存:常温干燥保存,复检期为一年。
注意事项:
- 使用前请先检查溶液P2、P3和结合液是否出现混浊,如有混浊现象,可在37℃水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。
- 洗脱缓冲液体积不应少于500μL,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率,DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
- 质粒DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于质粒DNA本身的性质,清除过程可导致部分质粒DNA丢失,但内毒素却能得到最大限度清除。
- 所有溶液应用无内毒素的高纯水配制,所有器械材料均应不含内毒素,玻璃器皿可高温烘烤,非挥发性水溶液可高压处理。
- DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。
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