产品货号:
QN0893
中文名称:
全血基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Blood Genomic DNA Extraction Kit(Spin column)
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:
产品组成:
保存:室温,其中RNase A、蛋白酶K置于-20℃,有效期1年。
注意事项:
使用方法:
相关搜索:全血基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法),全血DNA提取,抗凝血DNA提取,Blood Genomic DNA Extraction Kit(Spin column)
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取全血基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
产品组成:
| 组分 | 50T | 100T |
| RNase A | 100μL | 100μL×2 |
| 蛋白酶K | 1mL | 1mL×2 |
| 红细胞裂解液 | 60mL | 120mL |
| 白细胞裂解液 | 25mL | 50mL |
| 蛋白沉淀液 | 25m | 50mL |
| 漂洗液 | 15mL | 15mL×2 |
| 洗脱液 | 10mL | 20mL |
| DNA吸附柱 | 50套 | 100套 |
保存:室温,其中RNase A、蛋白酶K置于-20℃,有效期1年。
注意事项:
- 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。需自备无水乙醇(每瓶需要单独加入45mL无水乙醇)。
- 本试剂盒置于室温(15~25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2~8℃。
- 常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
- 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
- 如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
- 绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5~20μL,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
- 洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
使用方法:
- 样品的处理(本制品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的100~500μL血液样品):
- 在血液中加入2倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复上述步骤一次。
- 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为5~20μL,不需要再用红细胞裂解液处理,直接加500μL溶液A,振荡至彻底混匀。
- 在血液中加入2倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm离心1min,小心吸去上清,沉淀为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复上述步骤一次。
- 向沉淀中加500μL溶液A,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀,65℃水浴10min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。
- 待离心管降至室温后向液体中加入2μL RNase A、20μL蛋白酶K,充分颠倒混匀,室温放置10min。
- 加入500μL溶液B,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴5min,4℃,12000rpm离心5min,小心吸取下层液体(不要吸到上层或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,若还
有沉淀物,可再次离心。 - 加入0.7倍体积无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。
- 4℃,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
- 向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),4℃,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
- 向吸附柱中加入600μL漂洗液,4℃,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
- 4℃,12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
- 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50~100μL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心2min。
- 离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。
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