产品货号:
QN0892
中文名称:
全血基因组DNA提取系统(沉淀法)
英文名称:
Blood Genomic DNA Extraction Kit(Ethanol precipitation)
产品规格:
50T|200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。少量样本也可选购我公司吸附柱型试剂盒(全血基因组DNA提取试剂盒,货号QN0893)。
组分 | 50T | 200T |
10×红细胞裂解液 | 30mL | 120mL |
白细胞裂解液 | 30mL | 120mL |
蛋白沉淀液 | 30mL | 120mL |
DNA溶解液 | 15mL | 60mL |
保存:室温(15℃~25℃)干燥,有效期12个月。
- 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
- 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。
- 使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。
处理血液量 | 1mL | 5mL | 10mL |
1×红细胞裂解液 | 5mL | 25mL | 50mL |
白细胞裂解液 | 0.5mL | 2.5mL | 5mL |
蛋白沉淀液 | 0.5mL | 2.5mL | 5mL |
异丙醇 | 1mL | 5mL | 10mL |
75%乙醇 | 1mL | 5mL | 10mL |
DNA溶解液 | 100μL | 0.5mL | 1mL |
本操作步骤以1mL全血为例
- 样品的处理:在血液中加入3倍体积的1×红细胞裂解液(请确认已经稀释过),充分颠倒混匀,12000rpm离心1min(如为大量提取并且为大离心机,可11000转离心5min),小心吸去上清,再加入2倍体积的1×红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。
- 向沉淀中加500μL白细胞裂解液,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀。65℃水浴10~20min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。
- 加入500μL蛋白沉淀液,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm离心5min,小心吸取上清(不要吸到下层沉淀或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,如还有沉淀物,可再次离心。
- 在上清中加入1mL异丙醇,混匀。12000rpm离心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,弃掉上清。
- 向离心管中加入1mL 75%乙醇,12000rpm离心5min,弃去上清液。可再次短暂离心用移液器去除残余上清。
- 将离心管敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,否则乙醇可能影响后续的实验如酶切、PCR等。
- 向离心管中加入100~300μL DNA溶解液,室温放置让DNA自然溶解。如果DNA难于溶解,可室温放置过夜或将离心管置于50~60℃水浴中水浴加热5min。
DNA浓度及纯度检测:
得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
相关搜索:全血基因组DNA提取系统(沉淀法),全血基因组DNA提取试剂盒,全血基因组DNA抽提试剂盒