产品货号:
KD2169
中文名称:
粪便基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称:
Stool gDNA Extract kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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产品内容:
产品介绍:
Biorab粪便基因组DNA快速提取试剂盒适用于从各种动物粪便中快速提取基因组DNA。
提取的DNA OD260/280一般在1.8以上,纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接或者稀释后用作PCR扩增的模板。
可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。
注意事项:
1.裂解液I容易产生沉淀,,用前需要放置在65℃预热使沉淀溶解,用前充分摇匀。
2.自备试剂:氯仿。
(一)样品裂解:
1..称取0.1~0.3g的粪便,加入到含0.5mL预热裂解液I的1.5mL的离心管中,震荡器上剧烈震荡5~10分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。
2.将离心管置于65℃水浴中保温至少10分钟。
3.12000~15000g室温离心3分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为300~400μL)。
(二)样品纯化:
1.在上清液中加入等体积的裂解液II,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
2.将离心管冰浴至少5分钟。
3.12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL离心管中,体积在0.7mL左右。
4.加入0.2mL的氯仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
5.12000~15000g室温离心3分钟,小心转移上清到新离心管中。
说明:离心后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将0.5mL上清转移到新的1.5mL离心管中。如果有多余的可以弃之不用。
(三)基因组DNA收集:
1.在步骤(二)所得的上清中加入0.8mL的结合液III,颠倒数次混匀后,分多次上同一DNA吸附柱,每次上柱后均先室温放置2min,然后12000rpm离心1min,倒掉穿透液。
2.在吸附柱中加入500μL洗涤液,12000rpm离心1min,弃穿透液。
3.再将吸附柱12000rpm离心30 s以甩干乙醇。
4.将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附柱中央加入50μL洗脱液(65~70℃预热),室温静置5min。12000rpm离心2min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12000rpm离心1min以洗脱更多基因组DNA。
5.检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20℃冰箱。
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