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产品内容：

产品内容	KD2167-50T
裂解液I	50mL
纯化液II	15mL
结合液III	30mL
洗涤液	50mL
洗脱液(TE)	10mL
硅胶膜DNA吸附柱	50套
说明书	1份

自备试剂：乙醇，氯仿。

(一)样品处理：
1.骨粉的制备：用自备酒精将骨骼表面擦洗干净，以防污染物对后续PCR的影响，然后用骨钻在处理干净的骨骼区域钻取骨粉。
2.如果样品是骨粉成品或商品化骨粉，可以不作处理。

(二)样品裂解纯化：
1.称取0.2g骨粉，转移到2mL塑料离心管中。
2.加入1mL裂解液I，充分震荡混匀。
注意：裂解液I在4℃放置后会析出，使用前请65℃水浴溶解摇匀后再取用。骨粉加裂解液I后会很黏稠，需充分震荡混匀。
3.65℃水浴放置30min以上。
4.加入0.3mL纯化液II和0.2mL的氯仿(自备)，充分震荡混匀。
5.12000rpm离心3min，小心将上清液转移到一个新的离心管中。

(三)DNA收集：
1.在步骤(二)所得的上清中加入0.5mL结合液III，颠倒混匀。分两次转移到吸附柱中，每次上柱后均先室温放置2min，然后12000rpm离心1min，弃穿透液。
2.在吸附柱中加入500μL洗涤液，12000rpm离心1min，弃穿透液。重复洗涤一次。
3.再将吸附柱12000rpm离心30 s以甩干乙醇。
4.将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。在吸附柱中央加入50μL洗脱液(65～70℃预热)，室温静置2min。12000rpm离心2min。将穿透液重新加入吸附柱中央，12000rpm离心1min以洗脱更多DNA。
5.检测DNA质量。将所得的DNA保存于-20℃。

(四)实验建议：
1.骨粉制备是很关键的步骤，需要将骨骼充分研磨成粉状。
2.所得的DNA分子量不均一，电泳会呈弥散条带，一般在100bp～20 Kb之间，跟骨组织新鲜程度，骨粉的加工方法等有关。
3.所得DNA经充分纯化，可以直接用于PCR以及qPCR等实验。
4.如DNA产量较低，建议增大样品处理量(相应增加试剂用量)。
注意：如提取量扩大2～3倍(0.4～0.6g骨粉)，可以将与结合液III混合的上清分4～6次转移到同一个吸附柱中，可以提高DNA的浓度。
如提取量扩大10倍(2g骨粉)，超过吸附柱纯化范围。可以在(二)样品裂解纯化之后取上清，用异丙醇或者乙醇沉淀法沉淀DNA，用75%乙醇洗涤沉淀，后用TE溶解DNA(DNA产量比较高，纯度和吸附柱纯化方式相比稍差)。
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