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本试剂盒是专门用于深加工产品基因组DNA提取的试剂盒，深加工产品经过煮、煎、炸、腌制和发酵等数道工序制备而成，其原材料经过高温，机械损伤和极端环境（强酸强碱等）处理，基因组DNA严重断裂和降，因此从深加工产品中抽提基因组DNA存在一定的困难。本试剂盒将经典的CTAB裂解法和生物纳米磁分离技术相结合，CTAB裂解法保证深加工产品充分裂解，释放出其中的基因组DNA，然后通过一系列的处理将其中的杂质清除，得到的上清液中的基因组DNA采用生物纳米磁珠吸附，然后通过磁珠-DNA复合物的洗涤过程，清除吸附的杂质，最后在最佳的洗脱条件下获得基因组DNA。与市售的同类产品相比，本试剂盒最大特点是SgMag Beads替代硅胶膜柱，SgMag Beads能够特异性吸附裂解液中的基因组DNA，具有吸附效率高，吸附速度快等优势。另外，本试剂盒可以与核酸自动提取仪相结合，实现深加工产品基因组DNA提取的自动化和高通量化。采用本试剂盒所得到的基因组DNA质量高，可直接用于后续的real time qPCR检测。

• 通用型深加工产品基因组DNA提取试剂盒，适用于各种深加工食品材料。
  
• SgMag beads代替硅胶膜柱，吸附效率高，吸附速度快。
  
• 与传统柱式法相比，获得基因组DNA产量高。
  
• 可以微量体积洗脱，提高基因组DNA的浓度，便于下游实验。
  
• 与核酸自动提取仪配合使用，实现深加工产品的基因组DNA提取的高通量化和半自动化。

• 自备材料：磁力架、水浴锅、离心机、2mL离心管和70%乙醇。
  
• 请提前将水浴锅调至65℃备用。

• 样品处理
  
  • 固态产品：取足量的固态食品，液氮或者机械研磨至粉末，称取100～200mg的食品粉末至2mL离心管中。
    
  • 豆浆等液态产品：取20mL液态食品于50mL离心管中，12000rpm离心10min，弃上清。
    
  • 加工处理的干燥植物组织及中草药：称取经液氮研磨的100～300mg干燥的植物组织或者中草药粉末至2mL离心管中。
• 向上述含有生物材料的离心管中加入1mL GMO Buffer和20μL proteinase K，充分振荡混匀，65℃水浴30min，间或振荡混匀。
  
  • 依据食品材料的体积和大小，可以适量调节GMO Buffer的加量，食品材料需要完全浸没在GMO buffer中才能保证充分裂解。
    
  • 如果需要获得无RNA污染的基因组DNA，需要同时加入20μL 10mg/mL RNase A。
• 12000rpm离心10min，吸取全部上清至一个新的2mL离心管中。
  
• 向上清中加入400μL氯仿，充分混匀，12000rpm离心10min，转移上清至新的离心管中。
  
• 向上清中加入2倍体积的GMP Buffer，充分混匀，12000rpm离心5min，弃上清。
  
  • 如果需要提高基因组DNA的得率，可以加入GMP buffer充分混匀之后放置5～10min。
    
  • 弃上清时请勿吸到沉淀，否则影响最后基因组的得率。
• 向沉淀中加入350μL DRL Buffer，充分悬浮沉淀物。
  
• 向上述溶液中加入350μL MA Buffer和25μL SgMag Beads，充分混匀，室温放置3min，间或混匀。
  
  • 吸取SgMag Beads之前，请将其充分漩涡混匀。
• 将离心管置于磁力架上1min，待SgMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
    
  • 从磁力架上取出离心管后，若有少量上清，请将离心管置于磁力架上，再次吸取上清。
• 向离心管中加入700μL 70%乙醇，振荡混匀10 s，将离心管置于磁力架上1min，待SgMag Beads完全吸至管壁上之后，吸弃上清，从磁力架上取出离心管。
  
  • 吸弃上清前，若管口粘有少量SgMag Beads，请用上清液将其洗至离心管内，以确保所有SgMag Beads吸附至管壁上。
    
  • 吸弃上清时，请勿吸入SgMag Beads，尽量吸净上清。
• 重复步骤9一次，室温开盖干燥15min或者55℃恒温箱中开盖干燥5min至管内无液体残留。
  
  • 干燥前，请尽量吸净管内的液体。
    
  • 干燥前，若出现液体挂壁现象，可将离心管短暂离心之后，再将其置于磁力架上，待所有SgMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内的液体。
• 加入30～50μL TE Buffer (pH8.0)，65℃水浴5min，间或混匀。
  
  • 水浴之后可将离心管短暂离心，然后再进行第12步。
    
  • 请将管壁上所有SgMag Beads完全悬浮在TE Buffer中。
• 取出离心管并置于磁力架上1min，待SgMag Beads完全吸至管壁上之后，小心吸取上清至新的离心管，即获得基因组DNA。
  
  • 吸取上清前，请确保SgMag Beads完全吸至管壁，请勿吸入SgMag Beads，否则影响产物纯度。
    
  • 若洗脱步骤采用水浴，可以短暂离心之后再取上清。

• 得率低
  
  • 取样量太少。不同的食品材料含有的基因组DNA千差万别，如果需要可以在说明书给定的范围做各食品材料起始量的梯度，获取最佳的材料用量。
    
  • 样品裂解不充分。对于固态食品材料，需要将其充分研磨成粉末之后加入裂解液，裂解期间间或混匀，保证裂解充分；液体食品材料需要高速离心取沉淀，然后再加入裂解液，离心机转速一定要在10000rpm以上。
    
  • 结合不充分。加入Buffer MA和SgMag Beads之后，请将其充分混匀，并使SgMag Beads处于悬浮状态。
    
  • 操作过程中丢失SgMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的SgMag Beads粘在离心管管口上，吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口，使粘在管口的SgMag Beads也吸附在管壁上。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有SgMag Beads悬浮在TE Buffer中。
    
  • 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5～10min，常温条件下SgMag Beads只能释放少量的基因组DNA，65℃条件下SgMag Beads与基因组DNA的作用力减弱，磁珠释放出大量的基因组DNA。
• 获得的DNA条带弥散或者电泳没有可见条带
  
  • 食品材料都是经过深加工处理，其原材料中的DNA已经断裂降解，电泳获得DNA条带弥散属于正常现象；另外，一些DNA含量极少的食品材料，电泳条带不可见，需要后续real time qPCR验证才能知道是否获得目标DNA。
• 获得的DNA粘稠不纯
  
  • 诸如淀粉类食品材料如面粉，饼干等，这些食品材料中淀粉含量丰富，所以处理过中需要严格按照说明书进行，离心力一定达到说明书要求，吸取上清时要彻底。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验
  
  • 乙醇有残留。请吸弃上清之后从磁力架上取出离心管，放置1min之后再将离心管置于磁力架上30s，吸净管底的液体。
    若出现残液有不同程度的挂壁现象，请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30s，吸净离心管管底的液体。
    
  • 若初始材料取样太多也会造成DNA纯度不行。食品材料一定按照说明书要求进行。